[發明專利]亞麻微衛星DNA標記

無效

• 申請號: 200910044219.0
• 申請日: 2009-08-31
• 公開（公告）號: CN101665829A
• 公開（公告）日: 2010-03-10
• 發明（設計）人: 陳信波;鄧欣;龍松華;王玉富
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院麻類研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 長沙永星專利商標事務所
• 代理人: 周 詠;米中業

技術領域

本發明涉及一種亞麻微衛星DNA標記，適用于亞麻品種分類、遺傳關系鑒定和輔助育種。

背景技術

微衛星(Microsatel?lite)，又稱為簡單序列重復(simple?sequence?repeat，SSR)或短串聯重復(short?tandem?repeat，STR)，是以少數幾個核苷酸(1-6個)為重復單位的串聯重復DNA序列。由于微衛星具有高水平的雜合性和突變率、雙親遺傳模式等優勢，加之便于檢測，費用低廉，因此廣泛用于遺傳圖譜構建、基因定位、標記輔助育種、家系分析、品種鑒定以及進化分析等研究。如用微衛星標記研究櫻桃品種間的親緣關系(艾呈祥等，2007，果樹學報，24(4)：460465)、用微衛星DNA標記進行豬品種分類的專利申請“適于豬品種分類的豬微衛星DNA標記”(公開號CN?1370834A)。

亞麻(Linum?usitatissmum?L.)是亞麻科(Linaceae)亞麻屬(Linum)的一年生草本纖維植物，已經有六七千年的栽培歷史。亞麻既是世界第3大纖維作物，又是5大油料作物之一。作為一種重要的經濟作物，亞麻在微衛星分子標記方面的研究遠遠滯后于其他作物，大豆、棉花、水稻、葡萄、花生的SSR標記已有許多研究，并公開發表了大量可以直接利用引物序列，而現有亞麻的微衛星標記數量非常有限，僅有法國科學家Roose-Amsaleg等分離的28個微衛星標記(Roose-Amsaleg?C等，2006，Molecular?Ecology?Notes，6(3)：796-799)。這嚴重制約了微衛星標記在亞麻遺傳學、分子生物學方面的研究和應用。因此，迫切需要獲得更多獨立分離的、多態性豐富的亞麻微衛星標記。

發明內容

本發明旨在分離克隆微衛星DNA標記，建立亞麻的微衛星DNA的技術體系并利用這些分子標記進行品種分類，遺傳關系分析和輔助育種。

實現上述發明目的的技術方案包括亞麻(CT)_n和(GT)_n微衛星富集文庫的構建、含微衛星序列的陽性克隆的篩選及測序，得到17個含有(CT)_n和8個含有(GT)_n的微衛星克隆，確定了25個多態性豐富的微衛星標記LU1、LU2、LU3、LU4、LU5、LU6、LU7、LU8、LU9、LU10、LU11、LU12、LU13、LU14、LU15、LU16、LU17、LU18、LU19、LU20、LU21、LU22、LU23、LU24、LU25；LU1為214個核苷酸、LU2為265個核苷酸、LU3為328個核苷酸、LU4為250個核苷酸、LU5為173個核苷酸、LU6為202個核苷酸、LU7為363個核苷酸、LU8為199個核苷酸、LU9為206個核苷酸、LU10為270個核苷酸、LU11為511個核苷酸、LU12為196個核苷酸、LU13為302個核苷酸、LU14為196個核苷酸、LU15為393個核苷酸、LU16為314個核苷酸、LU17為369個核苷酸、LU18為394個核苷酸、LU19為356個核苷酸、LU20為305個核苷酸、LU21為462個核苷酸、LU22為249個核苷酸、LU23為308個核苷酸、LU24為258個核苷酸、LU25為616個核苷酸。

附圖說明

圖1是用LU1位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖2是用LU2位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖3是用LU3位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖4是用LU4位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖5是用LU5位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖6是用LU6位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖7是用LU7位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖8是用LU8位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖9是用LU9位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖10是用LU10位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖11是用LU11位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖12是用LU12位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。

圖13是用LU13位點的特異性引物擴增8個亞麻品種DNA的PAGE電泳圖。