[發明專利]一種用于鉻渣污染場地修復的菌株

無效

• 申請號: 200910043840.5
• 申請日: 2009-07-03
• 公開（公告）號: CN101684453A
• 公開（公告）日: 2010-03-31
• 發明（設計）人: 柴立元;楊志輝;彭兵;王云燕;閔小波;王海鷹;黃順紅;蘇長青;王兵
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A62D3/02;B09C1/10;C12R1/01;A62D101/43
• 代理公司: 中南大學專利中心
• 代理人: 胡 奕

技術領域

本發明涉及一種用于環境污染處理的菌株，特別涉及一種鉻還原功能菌。

背景技術

六價鉻是一種毒性較大致癌、致畸、致突變劑物質。環境中鉻污染主要來自于電鍍、制革、油漆、印染等行業含鉻廢水的排放以及金屬鉻和鉻鹽生產行業產生的固體廢物——鉻渣。微生物修復鉻污染的方法由于其成本低、無二次污染和操作簡單等優點而日益引起廣大環保工作者極大的興趣。分離獲得高效的鉻還原功能菌一直是研究者們致力開展的一項工作。國內外在這方面的報道較多，已分離具有還原六價鉻能力的細菌有多種，主要有脫硫弧菌(Desulfovibrio?vulgaris)、芽孢桿菌(Bacillus?sp.)、假單胞菌(Pseudomonassp.)、希瓦氏菌(Shewanella?sp.)、大腸桿菌(Escherichia?coli?sp)等。但是，迄今為止，尚未有關于Pannonibacter?phragmitetus還原六價鉻的報道。因此，本發明為六價鉻污染微生物修復提供了新的微生物資源。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新的鉻還原功能菌株，該菌株具有將六價鉻還原為三價鉻的功能，將該菌株用于鉻污染的治理，成本低，操作簡單。

發明人采集湖南鐵合金廠鉻渣堆放場污染土壤，經過篩選、分離、馴化，得到一種具六價鉻還原特性的菌株，經鑒定，該菌株16s?rRNA基因序列與Pannonibacter?phragmitetus?sp.16S?rRNA有99％的相似性，命名為Pannonibacter?phragmitetus?BB。該菌株已于2009年5月8日向中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)提交生物保藏，保藏號為CGMCCNo.3052。該菌株可廣泛用于鉻渣污染場地修復。

本發明中，篩選、分離、馴化該菌株的過程為：采集湖南鐵合金廠鉻渣堆放場下土壤，在液體培養基中，30℃恒溫培養箱中生長3～4天；稍振蕩，上部泥漿按稀釋梯度接種于含有50～250mg/L六價鉻濃度的固體培養基中，挑取不同形態菌，于含有50～250mg/L六價鉻濃度的液體培養基中，30℃振蕩培養；挑取已純化的單菌落，逐步提高鉻濃度，進行馴化。

所述液體培養基組成為：5g/L乳酸鈉、5g/L酵母膏和2g/L氯化鈉，其余為水，用5mol/L?NaOH調節pH＝9.5～9.8。所述固體培養基為：5g/L乳酸鈉、5g/L酵母膏和2g/L氯化鈉，15g/L瓊脂。

附圖說明

圖1：本發明的菌株的菌落形態圖；

圖2：本發明的菌株形態圖；

圖3：本發明菌株的系統發育分析樹；

圖4：用本發明菌株還原Cr(VI)的還原效果圖。

具體實施方式：

實施例1：本發明的鉻還原菌的分離純化及馴化

采集湖南鐵合金廠鉻渣堆放場下土壤，稱取10g鉻渣土壤于150mL已滅菌的錐形瓶中，加入10mL滅菌液體培養基(5g/L乳酸鈉、5g/L酵母膏和2g/L氯化鈉，其余為水，用5mol/L?NaOH調節pH＝9.5～9.8)，于30℃培養箱中培養4天。隨后取1mL泥漿按梯度稀釋成10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8，用移液槍從10^-6、10^-7和10^-8稀釋液中分別取0.1mL置于含有250mg/L?Cr(VI)(以K₂Cr₂O₇溶液作為鉻源)的固體培養基，固體培養基組成為：5g/L乳酸鈉、5g/L酵母膏和2g/L氯化鈉，15g/L瓊脂。用三角棒充分涂勻，將平板倒置于30℃培養箱中培養4天。用無菌的接種針挑取不同形態的菌落，劃線接種于含250mg/L?Cr(VI)的固體培養基上，固體培養基組分同上。倒置，于30℃培養箱培養4天。

分別挑取已純化的單菌落于上述含250mg/L?Cr(VI)液體培養基中，液體培養基組成：5g/L乳酸鈉、5g/L酵母膏和2g/L氯化鈉，250mg/L?Cr(VI)(以K₂Cr₂O₇溶液作為鉻源)，其余為水，當培養基顏色從最初的黃色變為蘭灰色時，培養液中Cr(VI)濃度低于檢出限。檢出限是指用分光光度法無法檢出培養基中的Cr(VI)。