[發明專利]一種育珠免疫增強劑的制備方法

無效

• 申請號: 200910041184.5
• 申請日: 2009-07-17
• 公開（公告）號: CN101804073A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發明（設計）人: 宋文東;黃翔鵠;梁飛龍;符紹;范潤珍;陶震;紀麗麗;王浩;胡世偉;李世杰;秦培文
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: A61K35/56
• 分類號: A61K35/56;A61P37/06;A61K31/4745;A61K31/60;A61K31/7076;A61K31/43;A61K31/685;A61K31/5383;A61K31/496;A61K31/7036
• 代理公司: 湛江市三強專利事務所 44203
• 代理人: 龐愛英

技術領域

本發明屬于一種免疫增強劑的制備方法。

背景技術

自古至今，珍珠一直被認為是一種最珍貴和最有價值的物品，是富貴和權利的象征。她可以作為裝飾品，讓人佩帶起來顯得高貴、純潔和典雅；她具有神奇的藥用功效，據藥典記載：珍珠性寒無毒，有鎮心潤顏、止渴墜痰、點目去膜、催下死胎，可治小兒驚風、腹瀉、創傷、抽搐和心悸等，在中藥上的應用比較廣泛；此外，珍珠也是美容保健佳品，她含有十多種人體必需氨基酸和二十多種微量元素，還含有特殊的抗衰老因子-卟啉類化合物，其美容功效十分顯著。

目前用于培育海水珍珠的珍珠母貝，主要是馬氏珠母貝(又名合浦珠母貝、馬氏珍珠貝)、大珠母貝(又稱白蝶貝)、珠母貝(又稱黑蝶貝)以及企鵝珍珠貝)，我國海水珍珠業經過40多年的發展，已形成產業化、規模化生產，年產量已達30t，產量占據了世界的95％以上，已超過日本的產量，在國際市場上占有重要地位，但在發展的過程中也暴露出一些問題[3]。比如海水珍珠養殖缺乏全面科學規劃，造成休養貝死亡率高、吐核率高，育珠貝存活率低、留核率低、商品珠比率低的現象，造成了母貝資源和入力資源的浪費。

目前，藥物處理細胞小片是一種比較常見的提高母貝留核率的方法，從傳統的紫藥水、紅藥水處理小片；發展到采用金霉素、鏈霉素、四環素、呋喃類藥物處理；近幾年研究的熱點集中在細胞小片的保養液，其中包括ATP、PVP、促珠泌素、細胞色素C、卵磷脂等保養液。使用保養液的目的大致有五個方面：一是維持細胞小片內外環境滲透壓的平衡，保證細胞小片離體后不被干死；二是殺菌滅毒，避免病菌感染；三是加速傷口愈合，促進珍珠質分泌；四是維持細胞呼吸所需的中性環境；五是提高手術受體貝的成活率。上述的藥物處理細胞小片的方法，在一定程度上提高了母貝的留核率和成活率，但是相對來說，作用時間不是很持久，長時間采用容易造成母貝的抗逆性反應。

珍珠的形成過程，通常是由軟體部(通常是外套膜)的上皮細胞分泌一種與珍珠的化學組成很相近的粘液，經酶的作用和自然脫水等過程，形成層覆一層的珍珠結構，貝類的外套膜與貝殼和珍珠的形成有非常直接的關系。研究表明細胞小片的外表皮細胞有強的堿性磷酸酶活性，表明該酶與珍珠的形成有密切的關系，它不僅涉及蛋白質的分泌，還參與蛋白質的合成以及貝殼與珍珠質前身物質的形成與礦化過程。此外，堿性磷酸酶是一種金屬酶，其活性中心主要是Mg²⁺、Zn²⁺。而具有該金屬的螯合物，在一定程度上可以提高堿性磷酸酶的活性，從而促進珍珠的形成。生物組織液即母貝自身組織勻漿液，可以降低母貝對異己的識別能力，從而降低母貝對珠核的排斥力。

發明內容

本發明的目的是提供一種育珠免疫增強劑的制備方法，研究一種新的細胞小片保養液，來提高母貝的留核率和成活率。通過合成的Zn²⁺金屬螯合物作為主體物質，添加適量的生物組織液作為調節劑，最后添加其他輔料，制備成為一種新型的珠母貝細胞小片保養液——免疫增強劑。其作用機理主要是通過化學和生物調控作用，降低母貝的分子識別能力，減少排斥反應，提高珠母貝的留核率，從而可以提高珍珠的產量和品質，進一步將帶動南珠產業的發展，從而將繁榮我國海水珍珠產業。

本發明的育珠免疫增強劑制備包括三個步驟：

(1)Zn²⁺金屬螯合物的誘導合成

采用溶劑揮發法合成本發明化合物，其步驟為

a.各取20mmol有機配體化合物(鄰啡羅啉和水楊酸)，充分攪拌，過濾；

b.稱量20mmolZnCl₂，用5ml蒸餾水溶解，攪拌使完全溶解，過濾；

c.將上述兩種溶液混合，水浴加熱，攪拌下滴加0.1mol/L的NaOH調節混合溶液pH值；

d.混合溶液冷卻至室溫，過濾，靜置；

e.濾液放置一星期后得到本發明化合物。

Zn²⁺金屬螯合物結構式如下：(見說明書附圖)

本發明合成的螯合物是由一分子鄰啡羅啉和水楊酸與一分子Cu²⁺配位合成。鄰啡羅啉和水楊酸可以從試劑公司購買純品。

(2)生物組織液的制備

在育珠過程中吐核的珠母貝或者是不能在插核的珠母貝為原材料，將這些貝的外套邊緣組織取出，勻漿，制備成10％的生物組織液，于-4℃保存。

(3)育珠免疫增強劑的制備

育珠免疫增強劑成分及配比如下：

Zn²⁺金屬螯合物????????0.1-1.0g