[發明專利]一種人巨細胞病毒UL49基因抗原肽、及其抗體與應用

無效

• 申請號: 200910040123.7
• 申請日: 2009-06-10
• 公開（公告）號: CN101580537A
• 公開（公告）日: 2009-11-18
• 發明（設計）人: 周天鴻;朱峰;李月琴;曾志峰;李弘劍
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/38;C12N15/63;C12N1/00;G01N33/569;C07K16/08;A61K39/42;A61P31/20
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司
• 代理人: 何淑珍

技術領域

本發明涉及免疫生物學領域，具體涉及人巨細胞病毒UL49基因的免疫學 研究，尤其涉及一種人巨細胞病毒UL49基因抗原肽、及其抗體與應用。

背景技術

人類巨細胞病毒(Human?Cytomegalovirus，HCMV)是一種在全世界不同 種族人群中廣泛傳播且感染率很高的病原體。目前研究發現，HCMV感染造 成的主要危害是引發移植感染、宮內感染，導致胎兒流產、骨髓發育不良、畸 形、智力低下等，因此是醫學和優生學以及骨髓移植研究中的重大課題。

病毒體外培養實驗發現，缺失UL49基因對HCMV是致死的，說明該基 因可能表達一個功能蛋白，因此UL49基因有望成為研究治療HCMV的一個 突破點。但目前HCMV?UL49生物學功能尚無法確定，也無直接證據表明UL49 基因是否表達蛋白，其中一個主要原因是難以得到效價高、特異性強的抗體。

傳統制備HCMV?UL49基因的抗體是采用HCMV?UL49編碼的氨基酸序 列，設計并制備全長及截取片段的原核表達蛋白，繼而以此為免疫原制備抗體， 這類方法的免疫原獲取過程復雜、所獲免疫原純度得不到保證，最終制備的抗 體效價與特異性均無法滿足研究的要求。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種可通過化學合成法合成 的，能夠獲得效價高、特異性強的抗體的人巨細胞病毒UL49基因抗原肽。

本發明的另一個目的在于提供由上述人巨細胞病毒UL49基因抗原肽制備 所得抗體。

本發明的另一個目的在于提供由上述人巨細胞病毒UL49基因抗原肽制備 所得抗體在制備體外診斷或治療人巨細胞病毒的藥物中的應用。

本發明的上述目的是通過如下方案予以實現的：

本發明人通過Genebank上已經公開的序列確定HCMV?UL49編碼氨基酸 序列，然后應用生物學軟件對HCMV?UL49編碼氨基酸序列進行B細胞表位 預測，主要是對以下幾個方面的分析預測：二級結構、跨膜區、親水性、可及 性、極性、柔韌性和抗原性等，然后對B細胞表位重疊區域分析，最后確定 一段12肽的高抗原性的特殊片段，該片段即為本發明的人巨細胞病毒UL49 基因抗原肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，其核苷酸序列如SEQ?ID No.2所示。

接著本發明人根據上述抗原肽制備相應的抗體，并采用ELISA法檢測抗 體的效價，采用Western?blot方法檢測抗體對UL49原核表達蛋白、真核表達 蛋白以及HCMV顆粒的特異性，結果根據本發明抗原制備得到的抗體效價可 達1∶8000以上，對UL49原核表達蛋白、真核表達蛋白以及HCMV顆粒也具 有高特異性。

由本發明人巨細胞病毒UL49基因抗原肽制備所得抗體，可以為多克隆抗 體也可以為單克隆抗體，因為該抗體的效價可達1∶8000以上，且又對UL49 原核表達蛋白、真核表達蛋白以及HCMV顆粒都具有高特異性，因此可用于 制備體外診斷或治療人巨細胞病毒的藥物。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

1.本發明的抗原肽為12個短肽，易于化學合成，且產物純度高；

2.利用本發明的抗原肽制備的抗體，其效價高、特異性強；

3.本發明的抗原肽制備的抗體是HCMV?UL49生物學功能研究的基礎要 素；

4.利用本發明的抗原肽制備的抗體，可以對HCMV感染進行定性或定量 檢測。

附圖說明

圖1為ELISA法檢測人巨細胞病毒UL49編碼蛋白的抗體效價曲線；

其中，1為稀釋后的血清的效價曲線，2為免疫前血清的效價曲線；

圖2為Western?blot檢測實施例2制備所得抗體針對UL49原核表達蛋白 的特異性的電泳圖；

其中，1為DE3裂解菌液，2為融合表達UL49大片斷(aa3～246)蛋白 的DE3裂解菌液，3為感染HCMV的HFF細胞裂解液；

圖3為Western?blot檢測實施例2制備所得抗體針對UL49真核表達蛋白 的特異性的電泳圖；

其中，1為Hela細胞裂解液，2為融合表達UL49全蛋白的Hela細胞裂 解液，3為感染HCMV的HFF細胞裂解液；

圖4為Western?blot檢測實施例2制備所得抗體針對HCMV感染細胞的特 異性的電泳圖；