[發(fā)明專利]一種抗腫瘤DNA疫苗及其制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910037237.6
• 申請(qǐng)日: 2009-02-18
• 公開（公告）號(hào): CN101485888A
• 公開（公告）日: 2009-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾曙光;張積仁;章錦才
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南方醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61P35/00;C12N15/52
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務(wù)所
• 代理人: 胡濟(jì)元

1、一種抗腫瘤DNA疫苗，該疫苗由人體益生的兼性厭氧細(xì)菌、人體益生的厭氧細(xì)菌、減毒的兼性厭氧細(xì)菌或減毒的專性需氧菌攜帶pCMV-mt?Hsp70-IRES-自殺基因構(gòu)成；所述的pCMV-mt?Hsp70-IRES-自殺基因是以pCMV質(zhì)粒為表達(dá)載體，以結(jié)核桿菌熱休克蛋白70基因和自殺基因?yàn)榭乖驑?gòu)成的重組質(zhì)粒，其中所述的結(jié)核桿菌熱休克蛋白70基因和自殺基因分別位于pCMV質(zhì)粒中的內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)的上游和下游。

2、權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的人體益生的兼性厭氧細(xì)菌是乳酸桿菌。

3、權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的人體益生的厭氧細(xì)菌是雙歧桿菌。

4、權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的兼性厭氧細(xì)菌是沙門氏菌。

5、權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的專性需氧菌是結(jié)核分支桿菌。

6、權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的自殺基因是單純皰疹病毒I型胸苷激酶基因或大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶基因。

7、權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的自殺基因是單純皰疹病毒I型胸苷激酶基因。

8、權(quán)利要求1～7之一所述疫苗的制備方法，該方法由以下步驟組成：

(1)從含有結(jié)核桿菌熱休克蛋自70的質(zhì)粒或DNA中通過PCR擴(kuò)增出結(jié)核桿菌熱休克蛋白70基因的cDNA；從含有自殺基因的質(zhì)粒或DNA中通過PCR擴(kuò)增出自殺基因的cDNA

(2)先用自殺基因的cDNA置換pCMV-IRES-EGFP質(zhì)粒中位于內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)的下游的EGFP基因，得到pCMV-IRES-自殺基因，然后mt?Hsp70cDNA連接到pCMV-ires-自殺基因中的內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)上游，得到pCMV-mt?Hsp70-IRES-自殺基因；

(3)通過電穿孔方法將所得pCMV-mt?Hsp70-IRES-自殺基因轉(zhuǎn)化到人體益生的兼性厭氧細(xì)菌、人體益生的厭氧細(xì)菌、減毒的兼性厭氧細(xì)菌或減毒的專性需氧菌中，即得本發(fā)明疫苗。