[發明專利]Nanog抑制型突變體及其在Nanog功能研究中的應用

無效

• 申請號: 200910037211.1
• 申請日: 2009-02-17
• 公開（公告）號: CN101492502A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: 裴端卿;張娟;張小飛
• 申請（專利權）人: 清華大學;中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/79;G01N33/68
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1.Nanog的核定位信號被突變的核定位序列突變蛋白質，其中核定位信號1和/或核定位信號2被失功能突變，從而影響Nanog蛋白質的核內定位的能力，但是其仍然能與野生型Nanog形成異源二聚體，并且抑制野生型Nanog的轉錄激活功能。

2.權利要求1中的突變蛋白質，其中所述失功能突變是將核定位序列突變成無關序列。

3.權利要求1或2所述的蛋白質，其中Nanog的核定位信號1如SEQ?ID?NO：6所示，和/或核定位信號2如SEQ?ID?NO：7所示。

4.權利要求2所述的蛋白質，其中所述蛋白質中核定位信號1的序列被突變為序列GIONMQ，和/或核定位信號2的序列被突變為序列GMNVDG。

5.權利要求1-4中任一項所述的突變的蛋白質，其中所述Nanog來源于小鼠。

6.編碼權利要求1或2所述的突變蛋白質的核酸。

7.如權利要求6所述的核酸，其如SEQ?ID?NO：8所示。

8.如權利要求6所述的核酸，其如SEQ?ID?NO：9所示。

9.如權利要求6所述的核酸，其如SEQ?ID?NO：10所示。

10.如權利要求7-10所述的核酸所編碼的蛋白質。

11.獲得包含能夠表達權利要求1-5中任一項的突變蛋白質的核酸的表達質粒的方法，其中，所述方法包括：

(a)使用適當的表達載體構建野生型Nanog基因的真核表達質粒；

(b)將(a)中構建的質粒進行目的氨基酸的點突變得到突變體；

(c)將(b)中得到的突變體同(a)中得到的野生型基因在細胞內定位上進行比較；

(d)將(b)中得到的突變體同(a)中得到的野生型基因在細胞中的轉錄激活能力上進行比較；

(e)將(b)中得到的突變體同(a)中得到的野生型基因共同轉染，檢測(b)中得到的突變體對(a)中得到的野生型基因的細胞內定位的影響；

(f)將(b)中得到的突變體同(a)中得到的野生型基因共同轉染，在細胞中檢測(b)中得到的突變體存在時，對于(a)中得到的野生型基因的轉錄激活能力的影響；

(g)選擇對于野生型Nanog的細胞內定位以及轉錄激活能力具有影響的突變體。

12.使用權利要求1-5中任一項的突變蛋白質作為Nanog的抑制型突變體工具抑制Nanog轉錄激活能力，從而研究Nanog功能的方法。

13.權利要求1-5中任一項的突變蛋白質用于通過抑制Nanog的轉錄激活能力來研究Nanog在細胞中的功能的用途。

14.使用權利要求6-10中任一項的突變的核酸作為Nanog的抑制型突變體工具抑制Nanog轉錄激活能力，從而研究Nanog功能的方法。

15.權利要求6-10中任一項的突變的核酸用于通過抑制Nanog的轉錄激活能力來研究Nanog在細胞中的功能的用途。