[發(fā)明專利]檢測(cè)二乙氧基硫代磷酸酯類有機(jī)磷農(nóng)藥的酶聯(lián)免疫試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910036614.4
• 申請(qǐng)日: 2009-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN101477123A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈玉棟;孫遠(yuǎn)明;王弘;謝桂勉;雷紅濤;徐振林;楊金易
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 廣州粵高專利代理有限公司
• 代理人: 林麗明;任 重

1.一種檢測(cè)二乙氧基硫代磷酸酯類有機(jī)磷農(nóng)藥的酶聯(lián)免疫試劑 盒，包括盒體、固體載體、特異性抗體溶液、二抗溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液、 濃縮提取液、底物液、底物緩沖液、濃縮洗滌液和終止液，其特征在 于所述固體載體為酶標(biāo)板，所述酶標(biāo)板包被了二乙氧基硫代磷酸酯類 有機(jī)磷農(nóng)藥抗原；所述特異性抗體溶液為抗二乙氧基硫代磷酸酯類有 機(jī)磷農(nóng)藥的抗體溶液；所述二抗溶液為辣根過(guò)氧化酶標(biāo)二抗溶液；所 述標(biāo)準(zhǔn)溶液為有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液；

所述有機(jī)磷農(nóng)藥為對(duì)硫磷、蠅毒磷、喹硫磷、三唑磷、辛硫磷、 除線磷、毒死蜱、乙基溴硫磷、氯唑磷、二嗪磷或治螟磷的任意一種 或者兩種以上的混合物；

所述二乙氧基硫代磷酸酯類有機(jī)磷農(nóng)藥抗原是用二乙氧基硫代 磷酰氯與氨基己酸親核取代合成半抗原，再采用活潑酯法將半抗原與 載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)制備得到；

所述抗二乙氧基硫代磷酸酯類有機(jī)磷農(nóng)藥抗體是單克隆抗體；

所述抗二乙氧基硫代磷酸酯類有機(jī)磷農(nóng)藥抗體的制備方法包括 以下步驟：

(1)二乙氧基硫代磷酰氯與對(duì)羥基肉桂酸反應(yīng)合成免疫半抗原；

(2)半抗原偶聯(lián)載體蛋白得到免疫原；

(3)免疫原免疫Balb/c小鼠制備脾細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞融合，篩選 分泌目標(biāo)抗體的雜交瘤細(xì)胞，采用Balb/c小鼠體內(nèi)誘生法制備腹水， 純化腹水得到抗二乙氧基硫代磷酸酯類有機(jī)磷農(nóng)藥單克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述底物液為過(guò) 氧化氫或過(guò)氧化脲的pH5.0磷酸-檸檬酸緩沖溶液；所述底物緩沖液 為含有3，3，5，5-四甲基聯(lián)苯胺或鄰苯二胺的pH5.0磷酸-檸檬酸緩沖溶 液；所述終止液為5～10％硫酸、鹽酸或氫氧化鈉溶液；所述濃縮洗 滌液為含有0.5～1.0％吐溫20的磷酸鹽緩沖液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述底物液為5～ 7％過(guò)氧化氫或過(guò)氧化脲的pH5.0磷酸-檸檬酸緩沖溶液；所述終止液 為10％硫酸溶液；所述濃縮洗滌液為含有1.0％吐溫20和0.1mol/L 磷酸鹽緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液 的濃度分別為0ng/mL、0.2ng/mL、0.8ng/mL、12.8ng/mL、204.8ng/mL、 1638.4ng/mL和6553.6ng/mL。

5.一種使用權(quán)利要求1所述試劑盒檢測(cè)樣品中二乙氧基硫代磷 酸酯類有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于包括下列步驟：

(1)樣品前處理；

(2)向權(quán)利要求1所述試劑盒的酶標(biāo)板微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液 或樣品溶液；加入二乙氧基硫代磷酸酯類有機(jī)磷農(nóng)藥抗體，溫育后洗 滌拍干，加入酶標(biāo)二抗，溫育后洗滌拍干，顯色、終止，用酶標(biāo)儀測(cè) 定吸光值；

(3)檢測(cè)結(jié)果分析。