[發明專利]毛果楊離體器官再生植株的方法

無效

• 申請號: 200910035029.2
• 申請日: 2009-09-14
• 公開（公告）號: CN101642049A
• 公開（公告）日: 2010-02-10
• 發明（設計）人: 王光萍;黃敏仁;程強;陳英;胥猛;張博;王明庥
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所（普通合伙）
• 代理人: 肖明芳

技術領域

本發明屬于植物組培再生技術領域，具體涉及毛果楊離體器官再生植株的方法。

背景技術

毛果楊主要分布于北美西部，在我國屬較難獲得的有關材料。2002年美國能源部橡 樹嶺國家實驗室(ORNL)和聯合基因組研究所(JGI)啟動了楊樹全基因組的測序計劃， 其材料來源于毛果楊(Populus?trichocarpa)的一個無性系(Nisqully-1)。本發明人對 這個無性系的組織培養進行了深入研究，建立了快速繁殖體系。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種毛果楊離體器官再生植株的方法，以填補國 內乃至世界空白。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

毛果楊離體器官再生植株的方法，將毛果楊的莖段或葉柄在含0.001～0.005mg/L TDZ的MS培養基上培養9～10天，再轉接至含0.001～0.002mg/L?TDZ的MS培養基上 培養14～16天，誘導出不定芽；將誘導出的不定芽繼續繼代在含0.001～0.002mg/L?TDZ 的MS培養基上進行壯苗，18～22天后，苗高可達4～5cm，再轉接于大量元素為1/2的 MS培養基上，18～22天可直接生根。

其中，優選的技術方案是：將毛果楊的莖段或葉柄在含0.003～0.005mg/L?TDZ的 MS培養基上培養9～10天，再轉接至含0.001mg/L?TDZ的MS培養基上培養14～16天， 誘導出不定芽。更優選的技術方案是：將毛果楊的莖段或葉柄在含0.005mg/L?TDZ的 MS培養基上培養9～10天，再轉接至含0.001mg/L?TDZ的MS培養基上培養14～16天， 誘導出不定芽。最優選的技術方案是：將毛果楊的莖段或葉柄在含0.005mg/L?TDZ的 MS培養基上培養10天，再轉接至含0.001mg/L?TDZ的MS培養基上培養15天，誘導 出不定芽。

其中，優選的技術方案是：將誘導出的不定芽繼續繼代在含0.001mg/L?TDZ的MS 培養基上進行壯苗，18～22天后，苗高可達4～5cm，再轉接于大量元素為1/2的MS培 養基上，18～22天可直接生根。最優選的技術方案是：將誘導出的不定芽繼續繼代在含 0.001mg/L?TDZ的MS培養基上進行壯苗，20天后，苗高可達4～5cm，再轉接于大量元 素為1/2的MS培養基上，20天可直接生根。

有益效果：本發明的毛果楊離體器官再生植株的方法，易于操作和實現，為開展楊 樹功能基因研究創造了基本條件。

具體實施方式

根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實 施例所描述的具體的物料配比、培養條件及其結果僅用于說明本發明，而不應當也不會 限制權利要求書中所詳細描述的本發明。

實施例1：不同細胞分裂素對不定芽誘導的影響。

1材料與方法

1.1材料：

毛果楊試管苗。

1.2方法：

分別采用無菌苗的莖段、葉柄及葉片誘導不定芽，以MS為基本培養基，附加不同 濃度的6-BA(六-芐基嘌呤)、TDZ(噻苯隆)、2ip(異戊烯腺嘌呤)和ZT(玉米素) 外源激素，蔗糖濃度均為3％(w/w)，pH5.7，光照強度2000Lx，每日光照16h，溫度 23～28℃。

2結果與分析：

將長為1cm左右的莖段、葉柄及1×1cm大小的葉片分別接種于MS附加各種細胞 分裂素的培養基上，培養20d后結果見表1。

由表1可知，三種外植體在MS分別附加4種不同種類細胞分裂素的培養基上均無 法直接誘導出不定芽。莖段和葉柄可誘導出愈傷組織，誘導率在0～100％不等，葉片誘 導率為零。在含TDZ的培養基上，隨著TDZ濃度的增加莖段愈傷組織誘導率可達100％。 不同外源激素組合的培養基產生的愈傷組織均有不同程度的玻璃化現象，且隨細胞分裂 素濃度增加而有所嚴重。

表1不同細胞分裂素對不定芽誘導的影響

(續表1)

注：A為莖段端部產生的愈傷組織，B為葉柄端部產生的愈傷組織，C為葉片產生的愈傷組織(無)

實施例2：最佳組培再生條件的摸索。