[發明專利]一種具有免疫增強活性的茶樹菇胞外粗多糖的制備方法

無效

• 申請號: 200910032934.2
• 申請日: 2009-06-09
• 公開（公告）號: CN101570579A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發明（設計）人: 鄧超;陳敬華;鄔敏辰
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P37/04;C12P19/04;C12R1/645
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1.一種具有免疫增強活性的茶樹菇胞外粗多糖，其特征在于外觀為淡黃色，是茶樹菇通過深層發酵獲得的發酵液經過濃縮，醇沉，脫蛋白，透析后冷凍干燥得到的。無毒，具有顯著的免疫增強活性。制備該多糖的發酵液所含氨基酸中谷氨酸占18％以上，天冬氨酸占12％以上，甘氨酸占8％以上，賴氨酸占7％以上，丙氨酸占6％以上。該多糖所含單糖以葡萄糖為主，用苯酚-硫酸法測得多糖含量為76.3％。

2.權利要求1所述的茶樹菇胞外多糖的制備方法。該方法由下列步驟組成：

(1)菌種培養

出發菌種為市售茶樹菇(Agrocybe?aegirit)；

①組織分離法

斜面培養基：PDA培養基，含1.5％～2.0％瓊脂，pH自然；

組織分離方法：將子實體外表用酒精進行表面消毒后，放入超凈工作臺上，用消毒過的刀片與鑷子切取菌柄與菌蓋交界處組織塊接入斜面培養基上，pH自然，置于25℃溫度下暗培養，5d后菌絲開始萌發，每隔2d檢查1次，除去污染，選擇菌絲生長速度快和長勢強的試管作為純母種；

②搖瓶種子培養

搖瓶種子培養基：PDA1L加磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0；

培養方法：從斜面菌種中取3～4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于搖瓶種子培養基中，250mL三角瓶裝培養基100mL于25℃，150r/min，振蕩培養7d；

③搖瓶發酵培養

發酵培養基：玉米粉2g/100mL、酵母粉0.3g/100mL、磷酸二氫鉀0.2g/100mL、硫酸鎂0.05g/100mL；

培養方法：將培養好的種子以15％的接種量接入搖瓶發酵培養基中25℃，150r/min，振蕩培養7d；

(2)胞外粗多糖的提取

將發酵液濃縮后調PH值為5.5，添加4倍體積發酵液的95％乙醇，4℃醇析17h，8000rpm離心得沉淀物，沉淀物用蒸餾水復溶后Sevage法去除游離蛋白，4℃醇析過夜，然后透析，冷凍干燥，粉碎后得到茶樹菇胞外粗多糖。

3.如權利要求2所述的茶樹菇胞外多糖的制備方法，其特征在于所述的去除游離蛋白質處理為Sevage法去除游離蛋白，按多糖溶液1/5的體積加入氯仿，然后加入氯仿體積1/5的正丁醇，混合后振蕩20min。蛋白質與氯仿-正丁醇生成凝膠，4000rpm離心20min，收集上清液，反復操作8次至氯仿-正丁醇層不渾濁為止。

4.如權利要求2所述的茶樹菇胞外多糖的制備方法，其特征在于所述的透析是指4℃醇析過夜后的離心沉淀物用蒸餾水復溶后取50mL裝入透析袋中，扎緊袋口，懸浮于蒸餾水中，透析48h，中間每隔12小時換水一次。

5.權利要求1所述的胞外多糖具有免疫增強功能。