[發明專利]一種快速檢測雙酚A的膠體金層析試紙條及制備方法

無效

• 申請號: 200910030402.5
• 申請日: 2009-04-09
• 公開（公告）號: CN101533014A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發明（設計）人: 胥傳來;李灼坤;劉麗強;徐麗廣
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/566
• 分類號: G01N33/566;G01N33/558;G01N33/552
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種雙酚A膠體金層析檢測試紙條，其特征在于由襯板和在襯板上依次銜接的樣品墊、金標結合墊、包被膜和吸水墊組成，金標結合墊為吸附雙酚酸BHPVA金標抗體的玻璃纖維棉，在包被膜上有用BHPVA偶聯的載體蛋白溶液印制的直線式隱形檢測線T線，用羊抗兔IgG溶液印制的直線式隱形對照線C線，兩條線平行排列。

2.根據權利要求1中所述的試紙條，其特征是：所述的襯板為不吸水的韌性材料；所述的韌性材料為硬質塑膠條，或不吸水硬紙條；

所述的樣品墊為玻璃纖維棉，或為尼龍膜，或為聚偏二氟乙烯膜，或為聚酯膜；

所述的金標結合墊為吸附BHPVA金標抗體的玻璃纖維棉；

所述的包被膜為硝酸纖維素膜，或為純纖維素膜，或為羧化纖維素膜；

所述的吸水墊為吸水濾紙或濾油紙。

3.根據權利要求1中所述的試紙條，其特征是：所述的BHPVA金標抗體為膠體金標記的BHPVA多克隆抗體，所述的偶聯BHPVA的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA，或為雞卵清白蛋白OVA。

4.權利要求1所述試紙條的制備方法，其特征在于首先制備偶聯BHPVA載體蛋白，用于制備相應的檢測線T線和抗體；制備BHPVA金標抗體，用于制備吸附BHPVA金標抗體的玻璃纖維棉；制備羊抗兔IgG抗體，用于制備對照線C線；

(1)、將BHPVA與載體蛋白BSA進行偶聯制備人工結合抗原BHPVA-BSA：

(2)、將人工結合抗原BHPVA-BSA按常規方法免疫制得抗BHPVA多抗；

(3)、用檸檬酸三鈉還原劑將氯金酸還原制成20nm-40nm的膠體金溶液；

(4)、用0.1mol/L?K₂CO₃或0.1mol/L?HCl調節膠體金溶液為pH?9.0，將10mL膠體金溶液加入50mL燒杯中，用電磁攪拌器250rpm攪拌，逐滴加入150μL多抗溶液，平衡過夜，逐滴加入5％?BSA，使BSA的終濃度為1％，持續攪拌5min，再將金標抗體溶液常溫3000rpm離心15min，棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀，余下的溶液體積以下稱原體積，取該余下的紅色上清溶液于4℃以11000rpm離心40min，溶液分為二層：透明上清及管底可流動的暗紅色沉淀；輕吸并棄去上清液，將可流動的暗紅色沉淀用重懸液混懸，恢復原體積后再離心；重復2～4次，以徹底除去未結合的蛋白質，最后用重懸液將沉淀混懸為原體積的1/10，4℃保存備用，獲得BHPVA膠體金標記抗體；

所述重懸液為含5％蔗糖的0.002mol/L?pH?9.0的硼酸鈉緩沖液；

(5)、將1:100～500稀釋的BHPVA膠體金標記抗體吸附于玻璃纖維棉中，37℃干燥，制備BHPVA金標結合墊；

(6)、在包被膜上用BHPVA偶聯的載體蛋白溶液印制直線式隱形檢測線T線，用羊抗兔IgG溶液印制直線式隱形對照線C線，兩條線平行排列；

(7)、試紙條的組裝：將樣品墊、金標結合墊、包被膜和吸水墊由一端依次粘附在襯板上，即得到用于免疫檢測的雙酚A膠體金層析檢測試紙條。