[發(fā)明專利]一種從木材中分離和純化纖維素的高效復(fù)合酶方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910029492.6
• 申請日: 2009-04-13
• 公開（公告）號: CN101532261A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張建中;黃慶國;徐祖奇;毛麗華
• 申請（專利權(quán)）人: 無錫益達(dá)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: D21C5/00
• 分類號: D21C5/00;C12S3/08;D21B1/04;D21C1/00;C12N9/08;C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 無錫盛陽專利商標(biāo)事務(wù)所（普通合伙）
• 代理人: 劉瑞平

1、一種從木材中分離和純化纖維素的高效復(fù)合酶方法，其特征在于：其包括以下步驟：

(1)、木材原料的預(yù)處理：將木材原料洗凈后削面為1cm～2cm大小，用超聲波滅菌器進(jìn)行滅菌處理，隨后投入降解池中，加水浸投，將其潤脹，得到預(yù)處理木質(zhì)素纖維素；

(2)、預(yù)處理木質(zhì)纖維素的酶解：在所述預(yù)處理木質(zhì)纖維素中加入高效復(fù)合酶，投料比為50:1～45:1(體積比)，常溫常壓下酶解28～36小時(shí)，即獲得木質(zhì)纖維素處理液，其中木質(zhì)素得以完全降解，纖維素、木質(zhì)素以及半纖維素呈半分離狀態(tài)；

(3)、纖維素處理液的純化：往木質(zhì)纖維素處理液中加入三氯甲烷，投料比為2:1～1.5:1(體積比)，混合萃取6～8小時(shí)，分離后移出三氯甲烷，三氯甲烷層中為木質(zhì)素，萃取率為90～96％。纖維素處理液中的纖維素得率為89～95％，純度為85～90％。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木材中分離和純化纖維素的高效復(fù)合酶方法，其特征在于：所述高效復(fù)合酶為以下各材料的混合物(g/L)：復(fù)合酶液800～1000mL，KH₂PO₄?0.3～0.5g，NH₄Cl?1～1.2g，MnSO₄?0.5～0.8g，CuSO₄?0.3～0.5g，軟腐菌95～100g，定容至1L。

3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種從木材中分離和純化纖維素的高效復(fù)合酶方法，其特征在于：所述復(fù)合酶的制備：在瓊脂培養(yǎng)基中接入單色下皮黑菌(Cerrenaunicolor)、變色栓菌(Trametes?versicolor)和黃孢原毛平革菌(Phanerochaetchrysosporium?EM-446)，在35℃下培養(yǎng)10～12天，從瓊脂表面移出1cm²～2cm²的菌絲體，接種到盛有2000mL營養(yǎng)培養(yǎng)基的5000mL三角瓶中，35℃下培養(yǎng)4天～5天，勻漿，將該培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至盛有50L主培養(yǎng)基的培養(yǎng)器中，振搖，35℃下培養(yǎng)5天～7天，離心后取上清液，即為木質(zhì)纖維素復(fù)合酶，其中木質(zhì)素過氧化物酶(Lignin?peroxidase，簡稱LiP)為2500U/L～3000U/L，錳過氧化物酶(Manganese-dependent?peroxidase，簡稱MnP)為800U/L～1200U/L，漆酶(Laccase)為60000U/L～130000U/L。

4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種從木材中分離和純化纖維素的高效復(fù)合酶方法，其特征在于：所述瓊脂培養(yǎng)基為包含以下質(zhì)量份數(shù)的材料混合物(g/L)：NaNO₃?1.8g/L～2.0g/L，K₂HPO₄?0.4g/L～0.6g/L，KCl?0.4g/L～0.6g/L，MgSO₄?0.4g/L～0.6g/L，F(xiàn)eSO₄?0.008g/L～0.012g/L，瓊脂12g/L～18g/L，木質(zhì)素磺酸鈣12g/L～18g/L，青霉素0.001g/L～0.003g/L，調(diào)pH至6.5～6.8，定容至1L。

5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種從木材中分離和純化纖維素的高效復(fù)合酶方法，其特征在于：所述營養(yǎng)培養(yǎng)基為包含以下質(zhì)量份數(shù)的材料混合物(g/L)：葡萄糖8～12g，蛋白胨0.2～0.3g，酵母抽提物0.3～0.5g，KH₂PO₄?0.8～1.2g，Na₂HPO₄·12H₂O?0.2～0.3g，MgSO₄·7H₂O?0.5～0.8g，定容至1L。

6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種從木材中分離和純化纖維素的高效復(fù)合酶方法，其特征在于：所述主培養(yǎng)基為包含以下質(zhì)量份數(shù)的材料混合物(g/L)：麩皮180～220g，木屑750～850g，蛋白胨0.3～0.5g，酵母抽提物0.5～0.8g，Na₂HPO₄·12H₂O0.2～0.4g，MgSO₄·7H₂O?0.4～0.7g，KH₂PO₄?0.8～1.2g，定容至1L。