[發明專利]人抗粘病毒蛋白A-hMxA的單克隆抗體及其制備和應用

無效

• 申請號: 200910029412.7
• 申請日: 2009-04-13
• 公開（公告）號: CN101570742A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發明（設計）人: 吳康;劉海燕;劉鵬
• 申請（專利權）人: 蘇州大學;劉海燕
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/40;G01N33/577
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司
• 代理人: 陶海鋒

技術領域

本發明涉及一種人抗粘病毒蛋白A-hMxA的單克隆抗體的制備及其應用，具體涉及人抗粘病毒蛋白A-hMxA的單克隆抗體，以及在胞外分泌該抗體的雜交瘤細胞株；本發明還涉及應用該單克隆抗體檢測人hMxA基因蛋白表達水平的多種免疫學方法。

背景技術

人抗粘病毒蛋白A-hMxA(human?myxovirus?resistance?A)是由人I型干擾素(IFNα/β)特異性誘導表達并具有抗多種病毒活性的三磷酸鳥苷水解酶蛋白，該蛋白在體內多種細胞或組織中通過IFNα/β等I型干擾素的誘導可高效表達，同時人機體在一些病毒感染或注射了I型干擾素的情況下，可以直接通過人外周血單個核細胞PBMCs(peripheral?blood?mononuclear?cells)樣本檢測出該蛋白的高效表達，上述的細胞IFNα/β的體外誘導也可檢測其高效表達。現有報道表明人的III型干擾素亦可誘導該蛋白表達但其誘導表達水平遠低于I型干擾素。更有意義的是：盡管一些病毒感染后可誘導該蛋白的表達，但該誘導表達方式是間接的必須通過激活I型干擾素介導的方式才能誘導該蛋白的表達。

盡管國內外已有IFNα/β抗體制備并建立了檢測方法(主要是ELISA檢測方法)，但IFNα/β基因是典型的誘導型表達基因，其蛋白含量極低且半衰期很短，因而在體內很難掌握測定該蛋白的最佳時機，而改用干擾素誘導的下游基因ISGs(Interferon?Stimulation?Genes)如人hMxA的表達情況(主要是考慮到這些基因表達蛋白非常穩定)作為替代(surrogate)指標來分析IFNα/β基因在體內被激活的狀態具有極其重要的意義。

作為I類干擾素誘導的主要蛋白之一，hMxA的表達水平可作為I型干擾素活性的重要分子指標是有可靠理論依據的：(1)該蛋白非常穩定，(2)其表達水平嚴格與I型干擾素呈濃度依賴性(dose?dependancy)。已有大量報道表明該基因僅受I型和III型干擾素的調控而不受II型干擾素的調節，而干擾素特別I和III型干擾素信號通路的激活與機體的病毒感染有很強的相關性，通過人hMxA基因轉錄水平特別是蛋白表達水平變化的分析在對小兒的細菌和病毒感染之間的鑒別診斷中有重要意義，為在臨床中正確指導抗小兒病原體感染用藥提供重要的指標。

同時，該蛋白作為人體先天性免疫系統中的重要功能蛋白之一，大量試驗表明：該蛋白有抗多種RNA病毒的活性，主要包括正粘病毒，副粘病毒，本雅病毒。近十年來，有報道表明該蛋白具有抗乙型肝炎病毒的活性，同時研究發現：在一些慢性活動性乙肝患者中，I型干擾素治療效果不佳與I型干擾素選擇性失去的誘導人hMxA活性有密切的相關性，因此人hMxA基因的轉錄水平和蛋白表達水平可成為評判I型干擾素對慢性活動性乙肝患者治療效果的重要指標，為此國內上海交通大學瑞金醫院申報了用于檢測乙肝患者樣本中的人hMxA基因轉錄水平(mRNA)定量測定試劑盒專利(參見：申請號為CN200410093480.7的專利申請文件)。該試劑盒主要是利用熒光標記實時定量PCR法原理而設計，利用該試劑盒檢測患者樣本不僅需要純化樣本中的RNA，還需要定量PCR儀等高級儀器，其操作比較復雜且技術和設備要求高，因而在中小醫院中的推廣應用有一定的難度；同時該試劑盒測定的是人hMxA基因的mRNA轉錄水平，而該基因本身為誘導型基因，轉錄本的半衰期很短，利用該試劑盒同樣存在如何掌握測定的最佳時機的問題。

不僅如此，本實驗室還利用該單抗對數例乙型肝炎表面抗原疫苗受免健康者的PBMCs樣本檢測還發現：在免疫期內，正常人的PBMCs樣本中的MxA基因均高表達，因此，如果可以得到特異性高、親和力高、應用范圍廣的抗人hMxA單克隆抗體，則該單抗有望成為：檢測乙型肝炎表面抗原疫苗免疫效果重要的輔助指標。

更有意義的是：國外相關學者以丙型肝炎病毒(HCV)和艾滋病毒(HIV)感染者為對象，研究二種病毒感染后的I型干擾素激活系統和I型干擾素信號通路時，發現這二種病毒感染與hMxA基因表達水平的改變存在很強的相關性，因此該基因非常有望成為主要的分子標記(Molecular?Marker)來分析上述感染者的病程。