[發(fā)明專利]比伐盧定的液相合成方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910028793.7
• 申請日: 2009-01-08
• 公開（公告）號: CN101475631A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發(fā)明（設計）人: 王良友;黃仰青
• 申請（專利權）人: 蘇州中科天馬肽工程中心有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61P7/02;C07K1/02;C07K1/06
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳忠輝

技術領域

本發(fā)明涉及一種20肽，具體說涉及比伐盧定的合成，尤其是比伐盧定的液相合成方法，屬于多肽合成技術領域。

背景技術

比伐盧定(bivalirudin)是2000年12月美國食品藥物管理局FDA批準上市的直接凝血酶抑制劑之一(商品名Angiomax，由Medicines制藥公司出品)，它來源于水蛭素衍生物，是一種合成的含20個氨基酸的多肽，是凝血酶直接的、特異的、可逆性抑制劑。其相對分子質(zhì)量為2180，氨基酸序列為：D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Ash-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tvr-Leu。

比伐盧定氨基端的D-Phe-Pro-Arg-Pro區(qū)域是與凝血酶活性點相互作用的位點，它可與游離型或與結(jié)合型凝血酶催化位點和底物識別位點發(fā)生特異性結(jié)合，從而直接抑制凝血酶的活性。因凝血酶可水解本品多肽順序中Arg3和Pro4之間的肽鍵，使本品失活，所以比伐盧定對凝血酶的抑制作用是可逆而短暫的。比伐盧定與水蛭素相反，經(jīng)腎排泄不是其主要的清除途徑，它可能是被內(nèi)源性多肽酶降解，可安全用于腎損害患者，腎功能正常時，比伐盧定的半衰期為25min。基于比伐盧定的以上特點與生物學活性，用比伐盧定作為防治血栓的藥物有諸多優(yōu)點：(1)專一性強，特異性直接抑制凝血酶活性，且對血栓結(jié)合的凝血酶也有抑制作用；(2)半衰期短，且對凝血酶的抑制作用是可逆性的，故而抗凝效果可以被預測，不需要實驗室監(jiān)測；(3)可安全用于腎損害患者。

比伐盧定在藥理學上克服了肝素、低分子肝素及水蛭素的缺點，用于抗凝防栓安全有效。諸多臨床試驗研究表明，它可替代肝素安全、有效地用于冠狀動脈血管成形術(PCI)、不穩(wěn)定型心絞痛以及急性心肌梗死溶栓輔助治療，尤其在肝素誘導的血小板減少癥Hf的抗栓治療中有獨特的優(yōu)勢，且在外周動脈介入治療PPI、心肺移植手術及腎功能不全患者防栓抗栓治療中亦顯示出良好的作用。因此，比伐盧定是一種有著很好臨床應用前景的藥物，目前已經(jīng)被歐美和其它地區(qū)，如：加拿大、以色列、新西蘭、阿根廷等國家批準，允許其上市。2005年全球銷售1.5億美元，2006年全球銷售2.1億美元，2007年全球銷售2.55億美元，其市場應用正在不斷擴大。然而，比伐盧定在我國尚未上市，Medicines公司也沒有在亞洲地區(qū)的上市計劃，這在很大程度上延誤了我國心血管醫(yī)療事業(yè)——尤其是冠狀動脈血管成形術的發(fā)展。實現(xiàn)比伐盧定的規(guī)模化和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，能夠很好地促進比伐盧定藥物在我國醫(yī)療事業(yè)的應用，提高心臟手術的醫(yī)療水平。

比伐盧定作為一個很有合成難度的多肽藥物，其高昂的合成成本限制了大規(guī)模生產(chǎn)和市場應用。目前，國內(nèi)外尚無使用液相合成法制備比伐盧定的文獻和專利報道。已有的主要研究論文及專利如下：

美國專利US5196404是比伐盧定的化合物專利，最早報導了比伐盧定的制備方法(1990年7月6日申請)，以BOC保護的氨基酸為原料，采用固相合成，最后用強刺激、劇毒的HF，在特殊的聚四氟乙烯裝置中切肽樹脂。此方法不適合規(guī)模化合成。隆薩股份公司于2006年3月4日申請的WO2006045503專利，與EP1737889、CN200580043573.1是同族專利，采用對酸不穩(wěn)定的樹脂，得到脫保護肽或部分保護肽，后者經(jīng)純化再脫保護得到目的肽。此法可以減少9位天冬酰胺變?yōu)樘於彼岬母狈磻軌虻玫郊兌却笥?9％的目的肽。上海子能2006年3月10日申請的CN200610024611.5專利，名稱為“固相多肽合成比伐盧定的制備方法”，系用Wang樹脂或CTC樹脂合成；Novetide公司2007年3月22日申請的WO2007033383專利，與EP1805204、US2007093423是同族專利，名稱為Process?forproduction?of?Bivalirudin，也是采用CTC樹脂進行合成。

上述文獻報道的比伐盧定的固相合成方法，需采用昂貴的特殊樹脂和大過量的特殊保護氨基酸及縮合試劑，難以實現(xiàn)大規(guī)模合成，生產(chǎn)成本高。有的工藝需要用到劇毒的氟化氫，需要特殊的反應裝置，也很難實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術存在的上述問題，提供一種生產(chǎn)成本相對較低、適宜規(guī)模化生產(chǎn)的比伐盧定的液相合成方法。

本發(fā)明的技術解決方案是：

首先，用液相法逐步合成三個全保護片段，即：