[發明專利]棉花花粉管微絲骨架的熒光標記方法

無效

• 申請號: 200910028615.4
• 申請日: 2009-01-05
• 公開（公告）號: CN101477000A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發明（設計）人: 唐燦明;岳潔瑜;吳李君;吳躍進
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 張素卿

1.一種棉花花粉管微絲骨架的熒光標記方法，包括以下步驟：

1)載玻片打孔

將25.5×76.2mm，1mm-1.2mm厚的載玻片中間用電鉆打出直徑為1cm的圓 孔，其中將孔一邊用蓋玻片封住，形成小室，粘附劑為指甲油；

2)培養花粉管

晴天上午收集剛開放花朵上的花粉，使其充分混合；將花粉灑在半固體培養 基表面，半固體培養基質量比成分：0.01％硼酸、0.03％四水硝酸鈣、0.02％七 水硫酸鎂、15％聚乙二醇8000、20％蔗糖和1％低熔點瓊脂糖，pH6.2，28℃光 照培養2-3h；

3)熒光標記

培養好的花粉管用含有質量百分濃度4％多聚甲醛、pH為6.9的50mM?Pipes 緩沖液室溫條件下固定1-2h；用Pipes緩沖液洗滌花粉管；將花粉管置于體積比 為0.1-0.2％的甘油或體積比為0.1-0.2％濃度的Triton?X-100中室溫滲透3-4h 或4℃冰箱過夜；用pH7-9的磷酸緩沖液洗滌花粉管；花粉管用濃度為1-2.5μg/ml 的羅丹明TRITC標記的鬼筆環肽避光染色2-4h，微絲骨架被熒光標記；用pH7-9 的磷酸緩沖液洗滌花粉管；熒光標記過的花粉管在共聚焦掃描顯微鏡下觀察。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述棉花為陸地棉。