[發明專利]甲醛測定試劑(盒)及甲醛濃度測定方法

無效

• 申請號: 200910028557.5
• 申請日: 2009-02-04
• 公開（公告）號: CN101793789A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N35/00;C12Q1/26;C12Q1/32;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種甲醛測定試劑(盒)，同時本發明還涉及測定甲醛濃度的方法，屬于食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

甲醛測定的測定方法主要有分光光度法、色譜法、電化學法、化學滴定法等：分光光度法測定的主要方法有乙酰丙酮法、鉻變酸法、MBTH法、付品紅法、AHMT法等幾種。分光光度法的優點是操作簡便；；缺點是靈敏度較低，有污染介質，對測定有干擾。

色譜法主要有氣相色譜、高效液相色譜法、離子色譜法等，直接利用色譜法較少，一般是和其它分析儀器相連用，如GC-MS、HPLC-UV等。色譜法方法簡單、快速、直接，但是操作繁瑣、試劑消耗量大、方法選擇性差等缺點。

電化學法包括示波極譜法、吸附伏安法和哥臘衍生試劑法，該法空氣中甲醛的靈敏度和準確度都很高，適合于測定室內空氣中微量甲醛。

熒光分析法因具有快速、簡便、靈敏度高、重現性好等優點而受到人們廣泛的重視，尤其是用于室內空氣環境中痕量甲醛的分析監測，其優點更為突出。化學發光分析法具有靈敏度高，線性范圍寬，儀器設備簡單等優點。

化學滴定法主要包括電位滴定法、碘量法及酸堿滴定法。

綜合上述，沒有一個方法可以使用自動化儀器檢測甲醛的，酶法檢測甲醛的試劑，酶法的優點是特異性高不受干擾、操作方便、成本低廉、可以大批量檢測，方法靈敏。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶三倍擴增法(EnzymaticTribling?Method)、酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，計量還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定甲醛濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的甲醛測定試劑(盒)，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行甲醛濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明甲醛濃度測定方法如下：

甲醛+輔酶+水?甲醛脫氫酶?甲酸+還原型輔酶

甲酸+乙醛?乳酸醛縮酶?乳酸

乳酸+輔酶?乳酸脫氫酶?丙酮酸+還原型輔酶

丙酮酸+輔酶A+輔酶?丙酮酸脫氫酶?二氧化碳+乙酰輔酶A+還原型輔酶

這種方法應用甲醛脫氫酶(formaldehyde?dehydrogenase；EC?1.2.1.46)酶(偶)聯乳酸醛縮酶(lactate?aldolase；EC?4.1.2.36)、乳酸脫氫酶(LactateDehydrogenase；EC?1.1.1.27；EC?1.1.1.28；EC?1.1.2.3)、丙酮酸脫氫酶(pyruvatedehydrogenase；EC?1.2.1.51)酶促反應比色終點法。甲醛脫氫酶酶解甲醛反應產生甲酸，再通過(偶)聯合乳酸醛縮酶、乳酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度，通過測量340nm處吸光度上升的程度，可以測算甲醛的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明甲醛測定試劑(盒)較為理想：

緩沖液????????????????????????????????100mmol/L

穩定劑????????????????????????????????500mmol/L

輔酶??????????????????????????????????3mmol/L

甲醛脫氫酶????????????????????????????10000U/L

乳酸醛縮酶????????????????????????????12000U/L

乳酸脫氫酶????????????????????????????12000U/L

丙酮酸脫氫酶??????????????????????????12000U/L

乙醛??????????????????????????????????9mmol/L

輔酶A?????????????????????????????????3mmol/L