[發(fā)明專利]甲醛測定試劑(盒)及甲醛濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910028554.1
• 申請日: 2009-02-04
• 公開（公告）號: CN101793786A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N35/00;C12Q1/26;C12Q1/32;C12Q1/48
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種甲醛測定試劑(盒)，同時本發(fā)明還涉及測定甲醛濃度的方法，屬于食品/環(huán)境檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

甲醛測定的測定方法主要有分光光度法、色譜法、電化學(xué)法、化學(xué)滴定法等：

分光光度法測定的主要方法有乙酰丙酮法、鉻變酸法、MBTH法、付品紅法、AHMT法等幾種。分光光度法的優(yōu)點是操作簡便；缺點是靈敏度較低，有污染介質(zhì)，對測定有干擾。

色譜法主要有氣相色譜、高效液相色譜法、離子色譜法等，直接利用色譜法較少，一般是和其它分析儀器相連用，如GC-MS、HPLC-UV等。色譜法方法簡單、快速、直接，但是操作繁瑣、試劑消耗量大、方法選擇性差等缺點。

電化學(xué)法包括示波極譜法、吸附伏安法和哥臘衍生試劑法，該法空氣中甲醛的靈敏度和準(zhǔn)確度都很高，適合于測定室內(nèi)空氣中微量甲醛。

熒光分析法因具有快速、簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點而受到人們廣泛的重視，尤其是用于室內(nèi)空氣環(huán)境中痕量甲醛的分析監(jiān)測，其優(yōu)點更為突出?；瘜W(xué)發(fā)光分析法具有靈敏度高，線性范圍寬，儀器設(shè)備簡單等優(yōu)點。

化學(xué)滴定法主要包括電位滴定法、碘量法及酸堿滴定法。

綜合上述，沒有一個方法可以使用自動化儀器檢測甲醛的，酶法檢測甲醛的試劑，酶法的優(yōu)點是特異性高不受干擾、操作方便、成本低廉、可以大批量檢測，方法靈敏。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶倍增法(Enzymatic?DoublingMethod)、酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(CoupleReaction)技術(shù)，計量還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定甲醛濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的甲醛測定試劑(盒)，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進(jìn)行甲醛濃度測定，而且測定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明甲醛濃度測定方法如下：

甲醛+輔酶+水?甲醛脫氫酶?甲酸+還原型輔酶

甲酸+乙酰-輔酶A?甲酸C-乙酰基轉(zhuǎn)移酶?輔酶A+丙酮酸

2輔酶A+輔酶?輔酶A-二硫還原酶?輔酶A-二硫+還原型輔酶

這種方法應(yīng)用甲醛脫氫酶(formaldehyde?dehydrogenase；EC?1.2.1.46)酶(偶)聯(lián)甲酸C-乙?；D(zhuǎn)移酶(formate?C-acetyltransferase；EC?2.3.1.54)、輔酶A-二硫還原酶(CoA-disulfide?reductase；EC?1.8.1.14)酶促反應(yīng)比色終點法。甲醛脫氫酶酶解甲醛反應(yīng)產(chǎn)生甲酸，再通過(偶)聯(lián)合甲酸C-乙?；D(zhuǎn)移酶、輔酶A-二硫還原酶的作用，最終二次將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度，通過測量340nm處吸光度上升的程度，可以測算甲醛的濃度大小。

實驗表明，從測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明甲醛測定試劑(盒)較為理想：

緩沖液????????????????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑????????????????????????????500mmol/L

輔酶??????????????????????????????????3mmol/L

甲醛脫氫酶????????????????????????????10000U/L

甲酸C-乙?；D(zhuǎn)移酶????????????????????12000U/L

輔酶A-二硫還原酶??????????????????????12000U/L

乙酰-輔酶A????????????????????????????4mmol/L

本發(fā)明的甲醛測定試劑(盒)可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、甲醛脫氫酶、甲酸C-乙?；D(zhuǎn)移酶、輔酶A-二硫還原酶、乙酰-輔酶A。

試劑(盒)可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1