[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)腺苷蛋氨酸的菌種及其篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910028186.0
• 申請(qǐng)日: 2009-01-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101481660A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周長(zhǎng)林;楊明華;李登奎;竇潔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/16
• 分類號(hào): C12N1/16;C12P19/40;C12R1/865
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 孫立冰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高產(chǎn)腺苷蛋氨酸的菌種及其篩選方法，還公開(kāi)了使用該菌種制備腺苷蛋氨酸的方法。?

背景技術(shù)

S-腺苷蛋氨酸又稱活性甲硫氨酸，英文名為S-adenosylmethionine，縮略語(yǔ)為SAM、SAMe或AdoMet。其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下圖：?

它是一種廣泛存在于生物體內(nèi)、具有重要生理活性的中間代謝物，在細(xì)胞代謝中的重要性僅次于三磷酸腺苷(ATP)。作為一種重要的生理活性物質(zhì)，它參與機(jī)體代謝的甲基化，并與包括基因調(diào)控、荷爾蒙活性、神經(jīng)傳導(dǎo)發(fā)育和解毒在內(nèi)的眾多關(guān)鍵的身體機(jī)能密切相關(guān)。研究表明SAM對(duì)多種疾病有明顯療效，如其對(duì)酒精性肝病、抑郁癥，以及阿爾茨海默癥等均具良好療效(NEWMANPE?2000)。SAM是生物體內(nèi)的一種天然分子。藥用SAM由意大利基諾(Knoll)藥廠首先用于臨床。1999年，美國(guó)FDA批準(zhǔn)SAM作為保健品上市，迅速在美國(guó)成為最暢銷的營(yíng)養(yǎng)品之一。自1973年以來(lái)，對(duì)該藥的臨床特點(diǎn)進(jìn)行了一系列研究，發(fā)現(xiàn)其對(duì)慢性肝臟疾病和抑郁癥有較好的療效。SAM治療抑郁癥的機(jī)理尚不清楚，但是可以肯定的是S-腺苷蛋氨酸是一種與已知其它抗抑郁藥化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)理均不相同的新型抗抑郁藥。其療效肯定，不良反應(yīng)輕，耐受性良好，而且起效可能較快。這些都讓我們看到了它在醫(yī)藥方面的巨大潛力。?

目前SAM的合成主要有化學(xué)合成法、酶促合成法和微生物發(fā)酵法，其中化學(xué)合成法是采用S-腺苷同型半胱氨酸和甲基供體合成。但是此法有產(chǎn)率低、反應(yīng)物S-腺苷同型半胱氨酸價(jià)格昂貴、反應(yīng)產(chǎn)物為(+)SAM的混消旋物、少量非活性(+)SAM難以分離等明顯缺點(diǎn)，因而在實(shí)際生產(chǎn)中很少應(yīng)用；酶促合成法是利用SAM合成酶催化底物L(fēng)-甲硫氨酸和ATP生成(-)?型SAM。該法雖具有反應(yīng)產(chǎn)物純度高、分離提純?nèi)菀住⒎磻?yīng)周期短等優(yōu)點(diǎn)，但是，SAM合成酶在動(dòng)植物和微生物體內(nèi)含量少、酶活性不高，且分離困難，因此一般只將其用于合成同位素標(biāo)記的SAM；微生物發(fā)酵法是采用在培養(yǎng)基中添加L-蛋氨酸，利用微生物發(fā)酵，可以獲得大量的SAM，再?gòu)闹刑崛【芐AM。現(xiàn)國(guó)內(nèi)外主要利用腺苷轉(zhuǎn)移活性高的酵母菌發(fā)酵法制取SAM，但未見(jiàn)具體的SAM生產(chǎn)規(guī)模表達(dá)量的報(bào)道，主要是因?yàn)椴捎谜T變后隨機(jī)篩選的方法，效率低，偶然性非常大。我國(guó)浙江海正藥業(yè)等已具備發(fā)酵法生產(chǎn)的能力，卻因?yàn)楸磉_(dá)或轉(zhuǎn)化量還較低、分離純化成本較高，大規(guī)模工業(yè)化與開(kāi)拓市場(chǎng)還在探索中。因此高效率低成本獲取SAM技術(shù)的研究具有重要的意義。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種高產(chǎn)腺苷蛋氨酸的菌種及其篩選方法，提高腺苷蛋氨酸的產(chǎn)量，解決在腺苷蛋氨酸生產(chǎn)過(guò)程菌種篩選效率低下的問(wèn)題。?

本發(fā)明篩選出的一株腺苷蛋氨酸高產(chǎn)菌株，命名為SAM0238，該菌株菌落為乳白色，有光澤，平坦，邊緣整齊，如圖1所示。其分類名為Saccharomyces?cerevisiae，保藏號(hào)為CGMCCNo.2842，保藏時(shí)間：2008年12月，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。?

本發(fā)明的菌株SAM0238的篩選方法包括以下步驟：?

a.制備釀酒酵母菌懸液：取活化后的釀酒酵母經(jīng)搖瓶培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，加入磷酸鹽緩沖液制成釀酒酵母菌懸液；?