[發(fā)明專利]一種炔雌醇類似物的分子印跡聚合物的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910027180.1
• 申請日: 2009-05-22
• 公開（公告）號: CN101565485A
• 公開（公告）日: 2009-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李飛;殷曉佳;江珂;彭艷;都述虎;胡琴;周學(xué)敏
• 申請（專利權(quán)）人: 南京醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C08F220/28
• 分類號: C08F220/28;C08F222/14;C08F220/06;C08F220/14;C08F220/56;C08F2/44;C08J9/26
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 李紀昌

一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子印跡聚合物制備技術(shù)，特別涉及一種對炔雌醇、雌二醇等甾類激素類藥物具有高選擇性、高親和性的富集分離材料的制備方法。

二、背景技術(shù)

環(huán)境或動物性食品中可能殘留的甾類激素對人們的身體健康具有潛在的危害，成為食品安全領(lǐng)域涉及的重要命題。如雌二醇、炔雌醇(17α-ethinylestradiol，EE2)等，它們的活性明顯強于天然甾類激素，因此在醫(yī)學(xué)上廣泛用于避孕藥的合成和疾病的治療，也在牲畜、水產(chǎn)養(yǎng)殖中作為動物的生長促進劑。這些激素類物質(zhì)常以藥物原形或代謝產(chǎn)物的形式隨糞便、尿液等排泄物排出到環(huán)境中，絕大多數(shù)激素類藥物排出到環(huán)境中仍具有活性，可直接污染土壤和水源。受污染的水源和土壤可能對農(nóng)作物及野生植物造成二次污染。目前已有報道環(huán)境中甾類激素改變了水生環(huán)境中浮游植物的許多性質(zhì)，例如減少單位環(huán)境中種類數(shù)目，減少生物量、細胞密度，增加多樣性、平均度，以及改變種類結(jié)構(gòu)。

目前，普遍應(yīng)用的甾類激素檢測技術(shù)包括了熒光光譜分析，質(zhì)譜分析，液相色譜，氣相色譜，薄層色譜，免疫檢測和一些組合分析技術(shù)，它們之中除了免疫方法，大多需要昂貴的投資，繁瑣的樣品預(yù)處理程序和大量使用有機溶劑。盡管免疫檢測已是非常適用的內(nèi)源激素分析手段，但在實際應(yīng)用中也存在專一性和靈敏性的問題，并且還依賴于大量的動物實驗，受到條件限制，如實驗成本高，不可能全面推廣，而且費時、費工，重現(xiàn)性、準確性并不理想。因此開發(fā)一種迅速、靈敏和經(jīng)濟的分析檢測技術(shù)顯得十分的迫切。

分子印跡(Molecular?Imprinting)是一項近幾年來迅速發(fā)展的分子識別新技術(shù)。它是通過化學(xué)分子的自裝配(Self-assembling)，合成對特定分子有特異性吸附的高分子化合物。在分子印跡反應(yīng)中，首先功能單體和模板分子之間通過化學(xué)鍵(包括共價鍵，離子鍵，氫鍵，以及范德華力等等)形成復(fù)合物，在隨后進行聚合反應(yīng)中，聚合鏈的增長和交聯(lián)將這種復(fù)合作用固化，洗脫模板分子，聚合物分子中就形成能特異性吸附模板分子的洞穴，這種聚合物被稱為分子印跡聚合物(Molecular?Imprinting?Polymer，MIP)。這項技術(shù)現(xiàn)在已經(jīng)用于手性色譜與親和色譜，固相萃取，模擬生物催化等多個領(lǐng)域。

MIP具有特效的選擇性和親和性，可方便地固定在玻璃、陶瓷、光纖上，用作固相萃取劑可簡化環(huán)境樣品體系復(fù)雜的預(yù)處理程序，為樣品的采集、富集和分析提供極大的方便。對毫摩爾水平以下的痕量物質(zhì)經(jīng)這一方法預(yù)富集處理后，達到色譜檢測限以上。大大減少樣品預(yù)處理的時間，真正做到快速檢測。

目前關(guān)于雌二醇的分子印跡技術(shù)是以聚合物來檢測模板分子，由于洗脫時不可能將模板分子全部洗脫，會造成“泄漏”，使得結(jié)果呈假陽性。

三、發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題：本發(fā)明針對上述技術(shù)問題，提供一種炔雌醇類似物的分子印跡聚合物微球的制備方法。該方法制備的MIP對炔雌醇呈現(xiàn)明顯的親和性，且在用于固相萃取材料時不會因為模板的泄漏而影響結(jié)果的準確度。

技術(shù)方案：一種炔雌醇類似物的分子印跡聚合物的制備方法，制備步驟為：a.以17-乙基雌二醇為模板，將模板分子、功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑和引發(fā)劑混合，超聲，在氮氣氣氛下，于60℃聚合12～24h，得聚合物；所述的功能單體為甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯或丙烯酰胺；所述的交聯(lián)劑為三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或雙甲基丙烯酸乙二醇酯；所述的致孔劑為乙腈或者甲苯。所述的引發(fā)劑為偶氮二異丁腈、偶氮二異庚腈或過氧化二苯甲酰；所述的模板分子與功能單體，其摩爾比為1∶1～1∶5；所述的模板分子與交聯(lián)劑，其摩爾比為1∶4～1∶8；所述的致孔劑的體積用量和模板分子摩爾量之比為60mL/mmol；所述的引發(fā)劑質(zhì)量和模板分子摩爾量之比為80mg/mmol；b.將步驟a制備的聚合物離心，棄去上清液，用甲醇-乙酸混合液浸洗去除模板分子，直至紫外檢測器檢測不到模板分子為止，得到分子印跡聚合物；c.將分子印跡聚合物，真空干燥，得到炔雌醇類似物分子印跡聚合物。

步驟a中，所述的超聲及通氮氣，其超聲時間為5min，通氮氣時間為10min。超聲是為了分散均勻；通氮氣是為了除氧，因為這個引發(fā)反應(yīng)是自由基引發(fā)，不能有氧氣存在，并且通氮氣能增加孔隙率。

步驟b中，所述的離心，其離心速度為15000rpm。保證聚合物能完全沉淀。

步驟c中，在真空干燥之前，聚合物用甲醇清洗，以除去殘留的乙酸。

有益效果：