[發(fā)明專利]一種藍(lán)藻藻藍(lán)蛋白的富集分離方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910026902.1
• 申請日: 2009-05-19
• 公開（公告）號: CN101560254A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王峰;高瑾;崔正剛
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K14/405;C07K1/14;C08F12/18;C08F8/32
• 代理公司: 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種藍(lán)藻藻藍(lán)蛋白的富集分離方法，其特征在于步驟為：藍(lán)藻破壁液的制備；JDN-3型樹脂富集藍(lán)藻破壁液中的藻藍(lán)蛋白；洗脫分離藻藍(lán)蛋白；JDN-3型樹脂層析分離；洗脫液在脫鹽后進行冷凍干燥，獲得一定純度的藻藍(lán)蛋白；

(1)JDN-3型樹脂制備：在容器中，放入氯甲基化聚苯乙烯樹脂球即交聯(lián)度10％的氯球和有機溶劑，氯球與有機溶劑的重量比為1∶8～15，通入氮氣保護，分散溶脹2～12小時，在適當(dāng)?shù)臄嚢柘拢尤攵嘁蚁┒喟罚嘁蚁┒喟放c氯球的重量比為2～12∶1，加入多乙烯多胺重量0.05％～0.1％的催化劑，加熱到70℃～90℃，攪拌反應(yīng)4～16小時，胺化后的樹脂用甲醇、四氫呋喃、去離子水依次洗滌至中性，用質(zhì)量濃度1％硝酸銀溶液檢測至洗滌后無氯離子存在，即得JDN-3型樹脂；

所述有機溶劑選用N，N-二甲基甲酰胺、吡啶、1，4-二氧六環(huán)或四氫呋喃；

所述催化劑選用二氯化錫、氧化鎂、三氯化鐵或氯化鈷；

(2)藍(lán)藻破壁液的制備：采用水作提取劑，藻粉或鮮藻與水的固液質(zhì)量比為1∶1～1∶10，攪拌均勻后，置于-10℃～-20℃下冷凍一定時間后，37℃融解，如此反復(fù)凍融4-6次；融化后的藍(lán)藻破壁液4800-18000r/min離心10-30min，取上層清液；

(3)JDN-3型樹脂富集藍(lán)藻破壁液中的藻藍(lán)蛋白：在容器中加入藍(lán)藻破壁液和JDN-3型樹脂，藍(lán)藻破壁液中蛋白質(zhì)濃度為10～35mg/mL，JDN-3型樹脂在藍(lán)藻破壁液中的重量體積百分濃度為5％～20％，密閉后，25～35℃下，在振蕩器上振蕩4～10小時，振蕩器轉(zhuǎn)速為100r/min，振蕩結(jié)束后，經(jīng)過抽濾，獲得飽和吸附藻藍(lán)蛋白的JDN-3型樹脂；

(4)洗脫分離藻藍(lán)蛋白：將步驟2中獲得的飽和吸附藻藍(lán)蛋白的JDN-3型樹脂，用含0.1～0.5mol/L氯化鈉的0.005～0.5mol/L的磷酸緩沖液多次洗滌，收集含藻藍(lán)蛋白的洗脫液，透析脫鹽后，真空濃縮獲得濃縮液；

(5)JDN-3型樹脂層析分離：采用濕法，將JDN-3型樹脂加到層析柱內(nèi)，使之自然沉降，直至達到所需的高度為止，將多余的液體放出，使液面剛好與柱床表面一致，步驟3中獲得的濃縮液的加入量為床層體積的1/10；

待濃縮液中的蛋白被完全吸附后，用含0.1～0.5mol/L氯化鈉的0.005～0.5mol/L的磷酸緩沖液梯度洗脫，控制流速在0.5～2mL/min，收集富含藻藍(lán)蛋白的洗脫液段；

(6)透析脫鹽、冷凍干燥：將收集的藻藍(lán)蛋白洗脫液透析脫鹽，最后冷凍干燥，得到純度A₆₂₀/A₂₈₀＞2.2的高純度藻藍(lán)蛋白粉末。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)藻藻藍(lán)蛋白的富集分離方法，其特征在于藍(lán)藻的種類為藍(lán)藻或螺旋藻干粉，或新鮮的螺旋藻，或取自野外的由多種微藻組成的太湖水水華藍(lán)藻。