[發(fā)明專利]一種利用離子交換樹(shù)脂直接提取蚯蚓纖溶酶的工業(yè)化生產(chǎn)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910026780.6
• 申請(qǐng)日: 2009-05-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101544968A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張治國(guó);連桂芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/68
• 分類號(hào): C12N9/68
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 張素卿

1.利用離子交換樹(shù)脂直接提取蚯蚓纖溶酶的工業(yè)化生產(chǎn)方法，包括：

(1)洗凈的鮮蚯蚓或冷凍的鮮蚯蚓加0.14mol/L?NaCl溶液、勻漿，攪拌提取1-2小時(shí)，離心或過(guò)濾取上清液，沉渣加0.14mol/L?NaCl溶液攪拌提取0.5小時(shí)、離心、合并上清，得蚯蚓粗提液；

(2)上清液用1mol/L?NaOH調(diào)節(jié)pH7.5-9.5，加無(wú)離子水調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度按電導(dǎo)率計(jì)至1-5ml/Ω；

(3)再用大孔陰離子交換樹(shù)脂進(jìn)行靜態(tài)或動(dòng)態(tài)離子交換，所用大孔陰離子交換樹(shù)脂是指D254、D290、ZGA351或ZGA451；

靜態(tài)離子交換-階梯洗脫：加入活化的大孔陰離子交換樹(shù)脂攪拌交換2-4小時(shí)、抽干；常水漂洗、抽干，重復(fù)洗滌一次；加入0.8-1.2mol/L?NaCl溶液攪拌洗滌、抽干，重復(fù)洗滌一次；加入2.5-4.5mol/L?pH?5-6NaCl溶液攪拌洗脫2-4小時(shí)、抽干、收集洗脫液，重復(fù)洗脫1次、合并洗脫液；

或者采用動(dòng)態(tài)離交層析-梯度洗脫：活化的樹(shù)脂裝層析柱，步驟(2)獲得的上清液上柱，無(wú)離子水洗滌，0.5-4.5mol/L?pH?5-6NaCl溶液梯度洗脫，收集、合并纖溶酶洗脫峰；

(4)洗脫液用冷酒精或冷丙酮沉淀，有機(jī)溶劑脫水，真空干燥；或者洗脫液通過(guò)超過(guò)濾洗滌、濃縮，冷凍干燥，得蚯蚓纖溶酶。