[發明專利]模擬IBDV多表位基因的分子設計及其應用

無效

• 申請號: 200910025577.7
• 申請日: 2009-02-10
• 公開（公告）號: CN101487011A
• 公開（公告）日: 2009-07-22
• 發明（設計）人: 王永山;王忠燦;唐雨德;譚維國;潘英;施正良;歐陽偉;李銀;王曉麗;潘群興;夏興霞;諸玉梅;張改平;王選年;陳光華
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院;中國人民解放軍南京軍區軍事醫學研究所
• 主分類號: C12N15/40
• 分類號: C12N15/40;C07K14/08;C12N15/63;C12N15/66;C12N1/21;A61K39/12;A61P31/14;G01N33/531;C12R1/19
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 張素卿

1、模擬IBDV多表位基因epis，其特征在于，該基因的長度為471bp，編碼155aa，命名為epis，其序列為SEQ?ID?NO.1。

2、權利要求1所述模擬IBDV多表位基因epis的所編碼的多表位蛋白rEPIS，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2。

3、權利要求1所述模擬IBDV多表位基因epis的基因工程應用。

4、權利要求1所述模擬IBDV多表位基因epis的重組表達質粒pET-epis。

5、根據權利要求4的所述模擬IBDV多表位基因epis的重組表達質粒pET-epis，其構建方法為：

化學合成權利要求1所述IBDV多表位基因epis，用pMD18-T載體克隆，獲得epis重組克隆質粒pMD-epis，根據pET28b(+)啟動子下游閱讀框，將epis基因的克隆質粒pMD-epis和pET28b(+)質粒用限制性內切酶SacI和HindIII酶切，經瓊脂糖凝膠電泳后，回收pMD-epis的epis基因片段和pET28b的載體片段，用T4DNA連接酶連接兩片段，轉化大腸桿菌JM109，涂布于含終濃度為30μg/mL卡那霉素的LB瓊脂平板上，37℃培養14h，挑取單菌落，接種在3mL含kan的LB培養基中，振蕩培養14h，抽提質粒，酶切鑒定，獲取陽性重組表達質粒pET-epis。

6、權利要求4或5所述模擬IBDV多表位基因epis的重組表達質粒pET-epis轉化大腸桿菌BL21(DE3)而獲得的重組菌pET-epis/BL21。

7、權利要求1所述模擬IBDV多表位基因epis的IBDV表位基因工程疫苗。

8、根據權利要求7所述的IBDV表位基因工程疫苗，其制備方法為：

培養誘導權利要求5所述的重組菌pET-epis/BL21，10000r/min高速離心20min沉淀菌體，棄上清液，用pH7.2的PBS緩沖液懸浮菌體，置于0℃冰水浴，超聲功率500～600W、每次超聲時間10min、重復2～4次超聲波破碎菌體直至渾濁菌液變為透明菌液，即為抗原重組模擬IBDV多表位蛋白rEPIS，用PBS調整抗原濃度至1000μg/mL，抗原與白油佐劑按1:1配比，乳化，即為IBDV表位基因工程疫苗。

9、權利要求7或8所述IBDV表位基因工程疫苗在制備傳染性法氏囊病診斷抗原方面的應用。