[發(fā)明專利]呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒和流感病毒檢測引物和探針

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910024423.6
• 申請日: 2009-02-24
• 公開（公告）號: CN101812532A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝茜;符芳芳;李楊霞
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇默樂生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 泰州地益專利事務(wù)所 32108
• 代理人: 王楚云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是涉及多種呼吸道病毒診斷用的引物和探針。特別地，本發(fā)明是一種能同時進行呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒和流感病毒四種病毒診斷的引物和探針。

背景技術(shù)

急性呼吸道感染90％以上是由病毒引起的，其中以呼吸道病毒最常見，如甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒呼吸道合胞病毒(RSV)以及腺病毒等，多種病毒具有感染力強、傳播快、潛伏期短、發(fā)病急等特點。呼吸道病毒感染常可導(dǎo)致較高的發(fā)病率和死亡率，尤其受到環(huán)境變化和生態(tài)平衡破壞的影響，病毒發(fā)生各種變異，常突然暴發(fā)，病情兇險，病死率高，并且近年來新的致病性病毒還在不斷地被發(fā)現(xiàn)，如人類偏肺病毒、SARS病毒、高致病性禽流感病毒等，給臨床診斷和治療及疾病的監(jiān)控帶來很大困難，如1997年在香港肆虐的禽流感以及2003年SARS的暴發(fā)。這些都提示我們即時與準(zhǔn)確的鑒別診斷，快速識別病原體，對預(yù)防疾病的傳播和患者的診斷治療至關(guān)重要。同時，鑒別診斷對于制定策略與計劃來應(yīng)對像SARS暴發(fā)一樣的公共衛(wèi)生危機也有非常重大的意義。因此針對多種呼吸道病毒感染病原的同時，快速檢測技術(shù)的建立將大大推進呼吸系統(tǒng)感染疾病的診斷與治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種同時對呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒和流感病毒進行診斷的引物和探針。

基于上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。

檢測和鑒定不同病毒的引物和配套探針可以混合使用，不會相互干擾檢測和鑒定的結(jié)果。用于檢測多種呼吸道病毒的引物和探針序列分別包括：

(1)合胞病毒引物和探針：

上游引物RSV?F：GCAAATATGGAAACATACGTGAACA

下游引物RSV?R：GCACCCATATTGTWAGTGATGCA

探針RSV?Probe：CTTCACGAAGGCTCCACATACACAGCWG?FAM-BHQ

(2)腺病毒引物和探針：

上游引物AdV?F：GCCACGGTGGGGTTTCTAAACTT

下游引物AdV?R：GCCCCAGTGGTCTTACATGCACATC

探針AdV?Probe：TGCACCAGACCCGGGCTCAGGTACTCCGA?HEX-BHQ?1

(3)副流感病毒引物和探針：

上游引物PIV-1F：GTTGTCAATGTCTTAATTCGTATCAATAATT

下游引物PIV-1R：GTAGCCTMCCTTCGGCACCTAA

探針PI?V-1Probe：TAGGCCAAAGATTGTTGTCGAGACTATTCCAA??FAM-TAMRA

上游引物PIV-2F：GCATTTCCAATCTTCAGGACTATGA

下游引物PIV-2R：ACCTCCTGGTATAGCAGTGACTGAAC

探針PIV-2Probe：CCATTTACCTAAGTGATGGAATCAATCGCAAAFAM-TAMRA

(4)流感病毒引物和探針：

上游引物IfB?F：AAATACGGTGGATTAAATAAAAGCAA

下游引物IfB?R：CCAGCAATAGCTCCGAAGAAA

探針I(yè)fB?Probe：CACCCATATTGGGCAATTTCCTATGGC??JOE-TAMRA

上游引物IfA?F：AAGACCAATCCTGTCACCTCTGA

下游引物IfA?R：CAAAGCGTCTACGCTGCAGTCC

探針I(yè)fA?Probe：TTTGTGTTCACGCTCACCGT?FAM-MGB

本發(fā)明的具體原理是利用一對靶核酸序列的特異性引物和探針，采用一步法實時熒光定量RT-PCR試劑盒，通過PCR技術(shù)實現(xiàn)靶核酸序列片斷的擴增。所使用的探針為兩端分別標(biāo)記熒光報告基團(R)和熒光淬滅基團(Q)的寡核苷酸。在探針完整時，報告基團發(fā)出的熒光被淬滅基團吸收，在PCR擴增過程中，DNA聚合酶的5’端外切酶活性將特異結(jié)合在靶核苷酸片斷上的熒光探針酶切降解，使報告基團的熒光信號可以被檢測，熒光信號量的變化與擴增產(chǎn)物量成正比，從而可以通過熒光強弱來判斷待測樣本中靶核苷酸序列的存在。