[發明專利]柿單寧凝膠固定啤酒酵母菌的制備方法

無效

• 申請號: 200910023742.5
• 申請日: 2009-08-31
• 公開（公告）號: CN101638648A
• 公開（公告）日: 2010-02-03
• 發明（設計）人: 張寶善;姜燭;陳錦屏;王軍
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: C12N11/04
• 分類號: C12N11/04;C12R1/865
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司
• 代理人: 申忠才

1.一種柿單寧凝膠固定啤酒酵母菌的制備方法，其特征在于它是由下述步驟組成：

(1)提取柿單寧

取打漿機粉碎的青柿果，按青柿果與提取劑、鹽酸的質量比為1∶4∶0.05加入提取器的燒瓶中，在90℃回流提取20分鐘，再重復提取2次，合并3次提取液，室溫靜置1小時，抽濾，除去殘渣，濾液用旋轉薄膜蒸發儀于45～50℃減壓濃縮至相對密度為1.2～1.3g/cm³、蒸發，除去提取劑，得粗提取物，將活化好的AB-8大孔吸附樹脂裝入3.5cm×80cm色譜柱中，粗提取物加蒸餾水稀釋至10mg/mL，以2mL/分鐘上柱，充分吸附，用蒸餾水淋洗至洗出液用苯酚-硫酸法檢測不出糖為止，再用3倍柱床體積的提取劑以2mL/分鐘洗脫，將洗脫液用旋轉薄膜蒸發儀于45～50℃蒸發，除去提取劑和部分水，再用真空冷凍干燥機真空干燥，冷阱溫度為-50℃，絕對真空度為50～100Pa，得到柿單寧粗品；

上述的提取劑是質量濃度為50％的甲醇水溶液、質量濃度為50％的丙酮水溶液、質量濃度50％乙醇水溶液、蒸餾水中的任意一種，鹽酸為分析純；

(2)配制溶液

用無菌蒸餾水將柿單寧粗品配制成質量濃度為3％～6％的單寧水溶液，用蒸餾水配制質量濃度為2.5％～4％的明膠水溶液和質量濃度為1％～3％的聚乙烯醇水溶液；

(3)制備啤酒酵母菌菌懸液

將啤酒酵母菌在25mL麥芽汁液體培養基中30℃活化24小時，再在250mL麥芽汁培養基中30℃擴大培養3天，制備成啤酒酵母菌增殖培養液，裝入無菌離心管中，3000轉/分鐘離心10分鐘，傾去上清液，得到菌體，用無菌蒸餾水洗滌菌體，在相同條件再離心菌體，得濕菌體，加入無菌蒸餾水，制成菌液濃度為2.8×10¹⁰個/mL的啤酒酵母菌菌懸液，備用；

上述的麥芽汁培養基是可溶性固形物濃度為10％的麥芽汁培養基；

(4)制備柿單寧凝膠固定的啤酒酵母菌

將質量濃度為2.5％～4％的明膠水溶液和交聯劑在110℃滅菌15分鐘，冷卻至25～45℃，將質量濃度為2.5％～4％的明膠水溶液和交聯劑混合，攪拌均勻，加入菌液濃度為2.8×10¹⁰個/mL的啤酒酵母菌菌懸液，混合均勻，25～45℃水浴中保溫，攪拌過程中緩慢加入質量濃度為3％～6％的單寧水溶液，質量濃度為2.5％～4％的明膠水溶液與交聯劑、菌液濃度為2.8×10¹⁰個/mL的啤酒酵母菌菌懸液、質量濃度為3％～6％的單寧水溶液的體積比為1∶0.025∶0.25∶1，單寧與明膠發生凝膠化作用，形成包埋劑，包埋啤酒酵母菌，包埋完畢后，室溫靜置12小時，過80目篩，分離聚沉物，制備成柿單寧凝膠固定的啤酒酵母菌；

上述交聯劑是質量濃度為1％～3％的聚乙烯醇水溶液或質量濃度為1％的CaCl₂水溶液；

(5)柿單寧凝膠固定的啤酒酵母菌保存

將柿單寧凝膠固定的啤酒酵母菌保存在0～4℃冰箱內。

2.按照權利要求1所述的柿單寧凝膠固定啤酒酵母菌的制備方法，其特征在于：在步驟2中，配制質量濃度為4％～6％的單寧水溶液、質量濃度為2.5％～3.5％的明膠水溶液和交聯劑；在步驟4中，質量濃度為2.5％～3.5％的明膠水溶液和交聯劑在110℃滅菌15分鐘，冷卻至25～35℃，將質量濃度為2.5％～3.5％的明膠水溶液和交聯劑混合，攪拌均勻，加入菌液濃度為2.8×10¹⁰個/mL的啤酒酵母菌菌懸液，混合均勻，25～35℃水浴中保溫、攪拌過程中緩慢加入質量濃度為4％～6％的單寧水溶液，交聯劑為質量濃度為1％～2％的聚乙烯醇水溶液。

3.按照權利要求1所述的柿單寧凝膠固定啤酒酵母菌的制備方法，其特征在于：在步驟2中，配制質量濃度為4.5％的單寧水溶液、質量濃度為3％的明膠水溶液和交聯劑；在步驟4中，質量濃度為3％的明膠水溶液和交聯劑在110℃滅菌15分鐘，冷卻至25℃，將質量濃度為3％的明膠水溶液和交聯劑混合，攪拌均勻，加入菌液濃度為2.8×10¹⁰個/mL的啤酒酵母菌菌懸液，混合均勻，25℃水浴中保溫，攪拌過程中緩慢加入質量濃度為4.5％的單寧水溶液，交聯劑為質量濃度為1％的聚乙烯醇水溶液。