[發明專利]批量生產乳狀病芽孢桿菌的方法

無效

• 申請號: 200910023548.7
• 申請日: 2009-08-10
• 公開（公告）號: CN101619295A
• 公開（公告）日: 2010-01-06
• 發明（設計）人: 趙振良
• 申請（專利權）人: 趙振良
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01P7/04;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明批量生產乳狀病芽孢桿菌的方法涉及生物技術領域，尤其涉及采用 生物學手段制取芽孢應用于農林牧業控制金龜子和蠐螬的危害技術。

背景技術

金龜子是種類多、危害大的地上害蟲，取食植物葉片，蠐螬是金龜子的幼蟲， 也是種類多、危害大的地下害蟲，取食農作物或花草林木的根系，危害近150 種植物，危害嚴重時可造成農作物缺苗斷條或草木成片枯死。由于金龜子一生 經過的卵、幼蟲、蛹和成蟲四個蟲態階段中，前三個蟲態都是在耕地內度過， 目前防治方法以種子拌藥和澆灌農藥為主，用藥又多以內吸性強的劇毒農藥為 主，如敵殺死、久效磷、3911、1059、呋喃丹等，不僅防治費用高，效果差， 而且還成為農作物農藥殘留量居高不下的主要原因，更是無公害蔬菜栽培的主 要障礙，由于化學除草技術的普及，農田中耕大幅度減少，目前農田中金龜子 和蠐螬都呈發展趨勢，控制金龜子和蠐螬發展，已為全社會關注。國外在上世 紀用活體蠐螬已成功研制出金龜甲芽孢桿菌，這種乳狀病芽孢桿菌為專性寄生， 對人、畜、家禽無毒無害，屬綠色環保型產品，是一種理想的微生物殺蟲劑， 并能在土壤中長期存活，而染病的金龜子和蠐螬又不斷增加土壤中芽孢菌的數 量，通過自然傳播產生長期的防治效果，其對金龜子和蠐螬毒性之強、控制時 間之久已卓見成效，為了開發這一產品，全世界對金龜子芽孢桿菌形成芽孢的 過程進行了廣泛的的研究，但至今尚無一種較好的方法在離體條件下產生大量 具有侵染力的芽孢，要生產菌劑又必須通過活體進行培養，近年來國內外專家 正試圖用人工培養該菌，但從金龜子體內獲得的芽孢很難在人工培養基上萌發， 解除休眠的營養體對營養要求苛刻，人工培養幾乎沒有進展，能盡快尋求規模 化生產乳狀病芽孢桿菌的方法，來突破這一生物制劑生產、應用的瓶頸，將對 從傳統農業向優質高效和可持續發展的現代農業轉變有著極其重要的意義。

技術方案

本發明的目的是：給農作物防治金龜子和蠐螬害蟲提供乳狀病芽孢桿菌生物 農藥原料，不僅要具有培育方法簡便、生產成本低廉，并要能規模化生產，而 且要能周年期培養出活性強的乳狀病芽孢桿菌，及時提供生產應用。

為了實現上述目的，本發明所采取的技術方案是：批量生產乳狀病芽孢桿菌 的方法以活體基質培養為途徑，利用金龜子生態特性，采用封閉式養殖欄建造、 誘捕金龜子集中產卵孵化飼養、分選適齡蠐螬、接種感染培養、制取乳狀病芽 孢桿菌五道步驟，首先選用有機物質配置疏松飼養基料，在田間建造網柵，網 柵內建養殖欄，欄底鋪設網紗，網紗上覆飼養基料得封閉式養殖欄；再在金龜 子出土活動期，晚間在其聚集活動區架設趨光燈，斷其燈管外鐵絲網電源，誘 捕金龜子后及時投放網柵中，并在養殖欄插上帶葉鮮果枝條，供金龜子取食和 適時交配產卵，并孵化得小蠐螬集中飼養；及時給養殖欄灑水與排水，保持飼 養基料濕度在30——40％之間，當蠐螬長至2——3克重時，選取出3齡大蠐螬； 用芽孢桿菌加無菌水配置成每毫升含1億個以上芽孢懸液，給每頭大蠐螬體腔 內注射0.01毫升，放入有飼養基料的飼育缸中，在20-30℃溫度下飼養；蠐螬 感染得敗血癥后，體內芽孢大量積累，致相繼死亡后，充滿芽孢時，取出蠐螬 研成碎漿，加無菌水和少量滑石粉稀釋并調配成每毫升含1億個以上芽孢菌液， 再在室溫下涼干，最后研粉過100目篩成細粉分裝，得乳狀病芽孢桿菌。

本發明的創新點有五點，一是養殖欄上建網柵下輔網紗，不僅能有效防止 金龜子外飛和蠐螬鉆入土層，而且能遮陰、滲水，給金龜子和蠐螬提供了良好 的生存環境；二是養殖欄剪插鮮果枝條，不僅給金龜子提供了食物，同時也給 金龜子提供了交配場所；三是用有機物質配制疏松飼養基料，即能方便金龜子 白天藏于飼養基料中并產卵，也能確保蠐螬有足夠的食物和疏松的生活環境； 四是選取三齡蠐螬接菌感染后在飼育缸中控溫培養，有利于萌發芽孢菌營養體 快速均勻生長，來獲得高生產量的乳狀菌孢子粉；五是利用了不同品種金龜子 產卵時間和蠐螬齡期差異，可以實現周年期生產，給農作物病蟲害防治提供活 性強的乳狀病芽孢桿菌。

本發明的有益效果是：規模化生產乳狀病芽孢桿菌的方法簡便，生產成本 低廉，并能周年期批量生產活性強的乳狀病芽孢桿菌，能夠滿足生產應用，來 有效控制金龜子和蠐螬對農作物的危害。

具體實施方式

一、封閉式養殖欄建造