[發(fā)明專利]一種用于防治小麥全蝕病的芽孢桿菌及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910021117.7
• 申請(qǐng)日: 2009-02-13
• 公開（公告）號(hào): CN101486983A
• 公開（公告）日: 2009-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃麗麗;劉冰;康振生;喬紅萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12P21/00;A01N63/02;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/07
• 代理公司: 西安西達(dá)專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 李文義

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于防治小麥全蝕病的新菌株， 特別涉及一種用于防治小麥全蝕病的芽孢桿菌及其制備方法。

背景技術(shù)

小麥全蝕病是侵染小麥根部的一種毀滅性病害，是世界各大小麥產(chǎn)區(qū)的重 要病害，在我國(guó)北方冬麥區(qū)和西北春麥區(qū)發(fā)病較嚴(yán)重，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大 的損失。陜西省80年代在咸陽(yáng)彬縣等地已有小麥全蝕病發(fā)生，90年代以來(lái)在關(guān) 中地區(qū)渭北旱塬、洛河下游、秦嶺北麓23個(gè)縣區(qū)都有全蝕病田塊，病區(qū)呈擴(kuò)大 的趨勢(shì)。目前，由于沒有抗病品種和特別有效的化學(xué)農(nóng)藥，并且輪作倒茬在小 麥大面積種植區(qū)應(yīng)用也存在一定的局限性，所以生物防治便成為防治小麥全蝕 病的一種有效措施。

小麥全蝕病生物防治研究較多，而且已經(jīng)有商品制劑應(yīng)用于生產(chǎn)，但是至 今仍存在一些亟待解決的問題：(1)長(zhǎng)期以來(lái)，土壤和根際微生物是小麥全蝕 病生防菌的最主要來(lái)源，但這些微生物易受外界條件的影響，不容易在植物體 內(nèi)定殖，防治效果不穩(wěn)定等。(2)用熒光假單孢菌來(lái)防治小麥全蝕病的研究比 較多，作用機(jī)理研究已達(dá)到分子水平，但應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)上的并不多，主要是 由于生防制劑本身受環(huán)境條件，包括溫度、濕度、降雨、光照等氣候條件、土 壤理化性質(zhì)、作物栽培條件以及植物生長(zhǎng)狀況等的影響較大，所以生防菌的篩 選應(yīng)該盡可能與將來(lái)應(yīng)用的環(huán)境條件相一致。

植物內(nèi)生菌是一種能在植物組織中定殖與運(yùn)轉(zhuǎn)，對(duì)植物無(wú)害甚至有益的微 生物，由于它在植物體內(nèi)有穩(wěn)定的生存空間，且能產(chǎn)生與宿主植物代謝相同或 相似的生理活性物質(zhì)，因而能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗病 性。近幾年，內(nèi)生菌因其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)在生物防治方面比根圍、葉圍等微生物更 具有應(yīng)用潛力，從而成為生物防治的研究熱點(diǎn)，為生物防治的應(yīng)用開辟了新的 天地。本發(fā)明將報(bào)道一株內(nèi)生細(xì)菌——芽孢桿菌EDR4菌株的發(fā)現(xiàn)及其防病作 用。

芽孢桿菌是一種比較常見的細(xì)菌，在植物病害防治的應(yīng)用上備受重視。這 是因?yàn)槠淠芘c病原菌競(jìng)爭(zhēng)根系中的營(yíng)養(yǎng)，進(jìn)而成為優(yōu)勢(shì)菌株，降低病原菌的危 害；加上可以產(chǎn)生內(nèi)生孢子，在逆境下容易存活；且在產(chǎn)孢過程中能產(chǎn)生對(duì)多 種病原菌有抑制作用的抗生物質(zhì)，應(yīng)用性極廣。目前，對(duì)芽孢桿菌的研究很多， 但是對(duì)于植物內(nèi)生芽孢桿菌的研究卻甚少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的旨在探尋生物農(nóng)藥的新來(lái)源，利用植物內(nèi)生菌資源而開發(fā)一 種可以用于小麥全蝕病防治的高效、可產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的生防菌菌株，提供芽孢桿 菌EDR4菌株的篩選、鑒定方法。

實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的的技術(shù)方案具體如下：

一種芽孢桿菌(Bacillus?sp.)EDR4菌株(以下簡(jiǎn)稱為EDR4菌株)，于2007 年8月16日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其簡(jiǎn)稱為 CGMCC，保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC?No.2133，保藏單位地址：北京市 朝陽(yáng)區(qū)大屯路中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼：100101。

本發(fā)明EDR4菌株的方法，具體方法包括下列步驟：

1)將采自我國(guó)陜西省田間自然生長(zhǎng)的小麥根系用自來(lái)水沖洗后展開晾干， 每株取1/4根系剪碎，各植株的根段樣品混合后稱取1g進(jìn)行表面消毒；

2)將表面徹底消毒后的樣品材料在消毒研缽中加9mL無(wú)菌水研磨至糊狀， 取原液、稀釋100倍液和1000倍液，分別搖勻后取200μL涂在加有多菌靈的 PDA平板上，每個(gè)處理重復(fù)3皿，在27℃下培養(yǎng)1周后，即可分離到EDR4菌 株。

所述的表面消毒的條件是：樣品先用70％酒精處理60s，接著在濃度為3.125 ％NaClO中處理6min，再用70％酒精處理30s，最后用無(wú)菌水沖洗3～5次。

所述的多菌靈是濃度為50μg/mL的25％可濕性粉劑。

檢測(cè)表面消毒是否徹底的方法是將消毒后的無(wú)菌水取200μL涂在PDA平板 上。

本發(fā)明的EDR4菌株經(jīng)菌落和形態(tài)的顯微觀察、染色反應(yīng)、常規(guī)生理生化特 性實(shí)驗(yàn)以及16S?rDNA序列分析，該菌株鑒定為的一個(gè)新菌株(EDR4)，具有以 下特征：

(A)形態(tài)特征：菌體為桿狀，2×8μm，革蘭氏染色陽(yáng)性，芽孢中生，周生 鞭毛；

(B)培養(yǎng)特征：菌落呈現(xiàn)圓形，表面有皺褶，無(wú)光澤，不光滑，菌落邊緣 不規(guī)則擴(kuò)展；