[發明專利]一種防治小麥病害的芽孢桿菌及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200910021079.5
• 申請日: 2009-02-10
• 公開（公告）號: CN101486981A
• 公開（公告）日: 2009-07-22
• 發明（設計）人: 黃麗麗;劉冰;喬宏萍;康振生;宮宇飛;高小寧
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/00;A01N63/02;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/07
• 代理公司: 西安西達專利代理有限責任公司
• 代理人: 李文義

技術領域

本發明屬于生物農藥技術領域，涉及一種防治小麥病害的新菌株，特別涉及一種防治小麥病害的芽孢桿菌及其制備方法和應用。

背景技術

小麥是世界性的重要糧食作物，全世界約有35％～40％的人口以小麥作為主要糧食(金善寶.中國小麥學.北京：中國農業出版社，1996：1-3.)。20世紀80年代以來隨著矮稈、半矮稈品種的推廣和水肥條件的改善，小麥病害的發生及危害在我國日趨嚴重。小麥條銹病在我國西南、西北麥區2001～2005年連年成災，由偶發性病害發展成常發性病害，使得我國廣大麥區的小麥生產處于條銹病大流行危害的威脅中；小麥全蝕病90年代以來在關中地區渭北旱塬、洛河下游、秦嶺北麓23個縣區也呈現擴大趨勢。目前，還沒有好的抗病品種來控制這幾種小麥主要病害的發生，因而殺菌劑的應用在小麥病害的防治中仍然占有重要地位。

雖然化學防治具有見效快、效果穩定、明顯、易于操作和低成本的特點，在控制小麥病害的發生中也取得了一定的成效，但無論哪種殺菌劑，大量單一類型長期使用，均有出現病菌產生抗藥性的風險，而且浪費人力、物力和財力，特別是會造成環境污染。因此，在推行的無公害農藥和可持續農業生產的今天，開發和研制不易產生抗藥性的、較少引起污染的環境友好型生物殺菌劑已成為農藥發展的必然趨勢。

植物內生菌是一種能在植物組織中定殖與運轉，對植物無害甚至有益的微生物，由于它在植物體內有穩定的生存空間，且能產生與宿主植物代謝相同或相似的生理活性物質，因而能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗病性。近年來，隨著植物內生菌(endophytes)及其物種多樣性和功能多樣性的發現，特別是由于內生菌的獨立進化，它們可更好地適應宿主、或產生某些對宿主有益的功能如產生抗菌等生理活性物質抵抗病原菌、害蟲的侵害，因而在植物病害的生物防治方面具有優勢并引起了植物病理學家的廣泛關注(Andrews?J?H.Biological?control?in?the?phylloshere.Ann?RevPhytopathol，1992，30：603～605.)。本發明將報道一株內生細菌—芽孢桿菌E1R-j菌株的發現及其防病作用。

芽孢桿菌是一種比較常見的細菌，在植物病害防治的應用上備受重視。這是因為其會與病原菌競爭根系中的營養，進而成為優勢菌株，降低病原菌的危害；加上可以產生內生孢子，在逆境下容易存活；且在產孢過程中能產生對多種病原菌有抑制作用的抗生物質，應用性極廣。目前，對芽孢桿菌的研究很多，但是對于植物內生芽孢桿菌的研究卻甚少。

發明內容

本發明的目的旨在探尋生物農藥的新來源，利用植物內生菌資源而開發一種可以用于小麥主要病害防治的高效、可產業化生產的生防菌菌株及其菌株的制備方法。

實現上述發明目的的技術方案具體如下：

芽孢桿菌(Bacillussp.)E1R-j菌株，(以下簡稱為E1R-j菌株)，已于2007年8月16日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其簡稱為CGMCC，保藏中心登記入冊編號為CGMCC?No.2134，保藏單位地址：北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101。

本發明的E1R-j菌株分離方法，具體包括下列步驟：

1)將來自中國陜西省田間自然生長的小麥根系用自來水沖洗后展開晾干，每株取1/4根系剪碎，各植株的根段樣品混合后稱取1g進行表面消毒；

2)將消毒后的材料在消毒研缽中加9mL無菌水研磨至糊狀，取原液、稀釋100倍液和1000倍液，分別搖勻后取200μL涂在加有多菌靈的PDA平板上，每個處理重復3皿，在27℃下培養1周后，可分離到E1R-j菌株，于-80℃保藏。

所述的表面消毒的條件是樣品先用70％酒精處理60s，接著在濃度為3.125％NaClO中處理6min，再用70％酒精處理30s，最后用無菌水沖洗3～5次。

所述的多菌靈是濃度為50μg/mL的25％可濕性粉劑。

檢測表面消毒是否徹底的方法是將消毒后的無菌水取200μL涂在PDA平板上。

本發明的E1R-j菌株經菌落和形態的顯微觀察、染色反應、常規生理生化特性試驗以及16S?rDNA序列分析，該菌株鑒定為芽孢桿菌的一個新菌株(E1R-j)，具有以下特征：

(A)形態特征：菌體為桿狀，2×8μm，革蘭氏染色陽性，芽孢中生，周生鞭毛；

(B)培養特征：菌落呈現圓形，表面有皺褶，無光澤，不光滑，菌落邊緣不規則擴展；