[發明專利]一種難溶水產膠原蛋白源ACE抑制肽的制備方法

無效

• 申請號: 200910020803.2
• 申請日: 2009-01-05
• 公開（公告）號: CN101457249A
• 公開（公告）日: 2009-06-17
• 發明（設計）人: 申鉉日;易美華;李從發
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14
• 代理公司: 西安弘理專利事務所
• 代理人: 羅 笛

1.一種難溶水產膠原蛋白源ACE抑制肽的制備方法，采用高壓高溫使難溶性膠原蛋白變性，獲得可溶性膠原蛋白，并使用金屬酶或堿性酶對該可溶性膠原蛋白進行水解，進而提取具有膠原蛋白功效的ACE抑制肽，該方法按以下步驟進行：

步驟1：制備沉淀物

選取新鮮海洋生物扇貝外套膜，清洗，在2℃～4℃的溫度條件下切塊，然后，在2℃～4℃條件下粉碎成漿，經高速離心分離，得到沉淀物；

步驟2：除去膠原蛋白以外的蛋白質

取當量濃度為0.1N的苛性鈉溶液，加入步驟1得到的沉淀物中，控制苛性鈉溶液與該沉淀物的質量比為15～20∶1，在溫度為2℃～4℃的環境中，攪拌12小時～48小時，然后，高速離心除去上清液，用蒸餾水清洗沉淀，高速離心除去上清液，得到沉淀物原料；

步驟3：分離高分子膠原蛋白和難溶膠原蛋白

分別取摩爾濃度為0.2M～0.5M的有機酸溶液和酸性蛋白酶，混合后，加入步驟2得到的沉淀物原料中，形成混合溶液，該混合溶液中，有機酸溶液與沉淀物原料的質量比為10～15∶1，酸性蛋白酶的基質比為0.2％～2％的，在溫度為2℃～4℃的環境中，以20轉/分～50轉/分的速度攪拌12小時～24小時，然后，以30000rpm～100000rpm的轉速離心分離，分別得到上清液和剩余物質，該上清液為高分子膠原蛋白，剩余物質為難溶膠原蛋白，

所述的有機酸溶液選用醋酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸或草酸中的一種或幾種的組合，

所述的酸性蛋白酶選用胃蛋白酶或Aspergillus?niger源酸性蛋白酶；?

步驟4：分解難溶膠原蛋白質

將步驟3得到的難溶膠原蛋白，用蒸餾水清洗后，再加入蒸餾水稀釋，形成懸浮溶液，取當量濃度為2N的氫氧化鈉溶液，加入該懸浮溶液中，調節懸浮溶液的pH值為7.0，然后，在壓力為1.0～2.1kg/cm²、溫度為120～132℃的條件下，煮沸1小時～2小時，冷卻至室溫，過濾，將得到的濾液凍結干燥，制得可溶性膠原蛋白粉末；

步驟5：取蒸餾水，將步驟4制得的可溶性膠原蛋白粉末加入該蒸餾水中，控制每毫升蒸餾水中加入10毫克～30毫克的可溶性膠原蛋白粉末，得到可溶性膠原蛋白溶液；

步驟6：制備酶解蛋白肽溶液

分別取氫氧化鈉溶液和蛋白酶，將氫氧化鈉溶液加入步驟5得到的可溶性膠原蛋白溶液中，根據所用蛋白酶的活性作用條件，調節該可溶性膠原蛋白溶液的pH值，然后，加入蛋白酶，控制溶液中蛋白酶的基質比為0.2％～2％，并在溫度為30℃～60℃的條件下，攪拌酶解8小時～48小時，之后，在溫度為98℃～115℃條件下，加熱10分鐘～15分鐘，使蛋白酶失去活性，制得酶解蛋白肽溶液，

所述的蛋白酶選用Bacillus?thermoproteolyticus源嗜熱菌蛋白酶或Bacillus?subtirus源堿性蛋白酶；

步驟7：將步驟6制得的酶解蛋白肽溶液高速離心分離，并收集上清液，將該上清液凍結干燥，即制得難溶水產膠原蛋白源ACE抑制肽。?