[發明專利]一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝

無效

• 申請號: 200910020732.6
• 申請日: 2009-04-21
• 公開（公告）號: CN101836584A
• 公開（公告）日: 2010-09-22
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 山東高端藍莓生物技術股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明屬于生物工程技術領域，涉及植物組織培養技術，具體涉及一種高灌藍莓工廠化組培快繁的工藝流程。

背景技術：

高灌藍莓(Blueberry)，學名越橘，系多年生灌木，原產北美。一般無法形成種子，大多采用扦插、壓條等繁殖方法，但高灌藍莓對溫度、土壤、氣候等要求比較嚴格，多數品種不易繁殖，扦插養護更不容易，而且高灌藍莓種質資源退化較為嚴重，扦插繁殖的質量很不理想。組織培養繁殖植物的技術是一種特殊的營養繁殖方式，現在一般稱為快速繁殖技術或微繁殖技術。它是在無菌條件下，利用植物體的一部分，包括細菌、組織和器官，在人工控制的營養和環境條件下繁殖植物的方法。該技術比較成熟，設備比較簡單，技術要求不十分高，而經濟效益可觀，越來越受到人們的重視。因此，采用工廠化生產方式繁育高灌藍莓品種既能防止品種退化，保證種苗質量，又能提供大量優質廉價的種苗。現有技術一般不針對藍莓的品種統一用單一培養基，導致出苗誘導率不高；而且誘導時間較長，生根難度大，成活率低，不能適應更加快速的市場需求。

發明內容：

本發明的目的是提供一種能降低污染率，提高生根成活率且誘導率更高的高灌藍莓組織培養快速繁殖方法。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案。

高灌藍莓組織培養快速繁殖方法，包括如下步驟：

(1)、外植體材料處理：即選用外植體材料進行處理，在殺死率和污染率最低的平衡點制備出符合要求的外植體；

(2)、誘導：即將步驟S1中所述的外植體接種到培養基上，在誘導條件下誘導出芽；所述培養基為瓊脂綜合培養基的改良；

(3)繼代培養：即將步驟S2中所得叢生芽新梢在繼代培養基中增殖培養；

進一步的，步驟S1采用當年生剪去葉片的嫩莖，自來水沖洗干凈，放入加入活性炭的0.1％氯化汞消毒液中8-30分鐘，在無菌工作臺上用無菌水沖洗3-5遍，切下解刨芽接種。

優選的技術方案中，所述步驟S1外植體材料處理包括清洗、消毒、和裁剪；所述清洗將用于制作外植體的外植體材料洗凈；所述消毒對洗凈的外植體材料作消毒處理；所述剪裁將消毒后的外植體材料裁成合適大小的外植體。

步驟(2)中所述培養基的配方為瓊脂綜合培養基+玉米素0.8--1.3mg/L+萘乙酸0.2---1.6mg/L，將外植體接種在誘導培養基上，1周后開始萌發，40-52天后芽長成4～5cm左右的新梢，側芽同時也萌發出5～10個叢生芽。

步驟(3)中所述培養基配方為瓊脂綜合培養基+玉米素1.0mg/L+吲哚丁酸0.2-0.6mg/L將叢生芽切割2cm左右莖段新梢，轉入繼代培養基上增值培養，后可分化出30～50個叢生芽，一般54-62天繼代培養一次，增值率在30～50倍。

所述外植體材料為高灌藍莓當年生去葉嫩莖。

所述清洗包括無菌水清洗和含洗潔精的水浸洗。

所述消毒包括酒精消毒和加入活性炭的氯化汞消毒液消毒。

采用本發明技術方案的高灌藍莓組織培養快速繁殖方法，與現有技術對比的有益效果在于：

使用的消毒液對越桔莖段滅菌時，以25min為宜，污染率與殺死率降到最低，成活率最高可達75％。

初代培養50d左右，部分莖段可直接誘導產生萌生芽，在附加玉米素1.0mg/L和萘乙酸1.0mg/L的改良瓊脂綜合培養基中，誘導時間更短，不定芽的萌芽率最高，達到86.67％；

越桔在改良生根培養基中，生根率達80％以上，其成活率可達95％

由于外植體材料處理包括清洗、消毒和裁剪，能夠獲得更加優質的外植體，為組織培養快速繁殖方法鑒定良好的基礎。

由于優選藍莓去葉嫩莖作為外植體材料，為組織培養快速繁殖提供良好的的材料保證。

由于清洗包括自來水沖洗和含洗潔精的水浸洗，可以使得清洗更加徹底。

由于消毒包括酒精消毒和加入活性炭的消毒液消毒，消毒更加徹底。

由于將外植體材料去掉葉之后切成0.5～1cm×0.85～1cm大小的嫩莖作為外植體，誘導培養更加方便，且效果更好。

具體實施方式：

下面結合具體實例對本發明的實施做進一步的說明：

實施例1：

1、外植體材料處理：包括對外植體材料進行清洗、消毒和裁剪等處理，以制備出合乎要求的外植體。