[發明專利]從發酵法生產衣康酸的廢菌絲體中提取蛋白質的方法

無效

• 申請號: 200910020304.3
• 申請日: 2009-04-07
• 公開（公告）號: CN101531714A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發明（設計）人: 劉建軍;李丕武
• 申請（專利權）人: 山東輕工業學院
• 主分類號: C07K14/38
• 分類號: C07K14/38;C07K1/14;A23K1/16
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司
• 代理人: 趙會祥

技術領域

本發明涉及一種從發酵法生產衣康酸的廢菌絲體中提取蛋白質的方法，屬于生物技術領域。

背景技術

衣康酸是一種高科技、高利潤、高創匯產品，是重要的化工原料。衣康酸及其酯類是生產晴綸等化學纖維、合成樹脂、塑料、橡膠、表面活性劑、無毒食品包裝材料、除草劑、粘著劑以及塑料助劑等的工業原料，參見Yahiro?K?et.al.Breeding?of?Aspergillus?terreusMutant?TN-484?for?Itaconic?Acid?Production?with?High?Yield[J].Journal?of?FermentationBiology，1995，79：506-508。由于其分子內部含有兩個活潑的羧基和一個雙鍵，雙鍵與羧基呈共軛關系，使得衣康酸的性質非常活潑，除可自身聚合外，也可以和不同數目的其它單體聚合，形成聚合高分子，因此廣泛應用于化學合成行業。另外，衣康酸在水處理技術、高強度玻璃鋼及農藥中間體、除垢劑等領域中也具有廣泛中用途。隨著科學技術的發展和各個行業之間的交叉滲透，衣康酸新的用途也將不斷被開發出來。

目前，衣康酸主要以玉米淀粉為原料采用土曲霉(Aspergillus?terreus)深層發酵工藝生產，參見Riscaldati?E?et.al.Effect?of?pH?and?stirring?rate?on?itaconate?production?by?Aspergillusterreus[J].Journal?of?Biotechnology，2000，83：219-230.和Bonnarme?P?et.al.ItaconateBiosynthesis?in?Aspergillus?terreus[J]Bacteriol，1995，177：3573-3578。工業生產規模日益擴大。發酵結束后會產生大量的土曲霉廢菌絲體殘渣，發酵液過濾后產生的濕渣重量占發酵液總量的2％。由于其中有少量衣康酸殘留，因此適口性較差，無法直接作為動物的飼料，生產企業采用的處理方式只能是鍋爐焚燒，或置于空場堆放，待風干后集中填埋。由于菌體久置會自溶，并產生難聞的氣味，尤其是夏季，從廢菌絲體中流出的污水和散發出的惡臭對廠區周圍的環境造成嚴重污染，而且會成為廠區內雜菌滋生的發源地。因此有必要對廢菌絲體進行綜合治理。與此同時，我國養殖業對飼料蛋白的需求量日益增加，例如飼用大豆蛋白的70％依靠進口，參見丁國文.擴大非糧食飼料原料供給[J].中國飼料，2006，22：22-23。因此，從廢棄菌渣中提取蛋白質，擴大飼用蛋白的生產渠道，具有積極的現實意義。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種從發酵法生產衣康酸的廢菌絲體中提取蛋白質的方法。以改變目前衣康酸生產中廢菌絲對生產環境構成污染的現狀，實現廢物利用，變廢為寶的目的，同時提供一種新的飼料蛋白的來源。

原料說明：

現有技術中(參見Riscaldati?E?et.al.Effect?of?pH?and?stirring?rate?on?itaconateproduction?by?Aspergillus?terreus[J].Journal?of?Biotechnology，2000，83：219-230)發酵法生產衣康酸產生的土曲霉廢菌絲體的主要成分如表1所示：

表1?土曲霉廢菌絲體成分測定結果

上述蛋白質的測定采用微量凱氏定氮法[GB/T14771—93]，粗纖維的測定采用GB/T5009.10-2003中的方法，脂肪的測定采用索氏抽提法(GB?5512-85)。

從表1中可以看出，發酵生產衣康酸產生的土曲霉廢菌絲體成分中含量最多的是蛋白質，對這部分蛋白質進行提取，可實現變廢為寶的目的。

發明概述

首先將從衣康酸生產企業取來的土曲霉廢菌絲體進行磨碎、篩分及酸洗等預處理，然后在適宜的條件下用NaOH脫菌絲體蛋白，經過抽濾后收集得到的蛋白液，用酸調pH至菌體蛋白的等電點將菌體蛋白沉淀下來，離心洗滌后干燥得到菌體蛋白。

發明詳述

一種從廢菌絲體中提取蛋白質的方法，所用原料為發酵法生產衣康酸所產生的土曲霉廢菌絲體，包括廢菌絲體磨碎過篩、清洗、堿液提取蛋白、過濾、蛋白沉淀及干燥，步驟如下：

(1)廢菌絲體磨碎過40目篩，用0.6～1M的稀鹽酸清洗，除去廢菌絲表面雜質。