[發明專利]檢測細菌毒素的納米增效糖基功能化分子印跡膜電極的制備方法及應用

無效

• 申請號: 200910018459.3
• 申請日: 2009-09-29
• 公開（公告）號: CN101672818A
• 公開（公告）日: 2010-03-17
• 發明（設計）人: 黃加棟;裴梅山;于京華;汪世華;葛慎光;朱晗;林青;張秀明;邢憲榮;賀曉蕊;孫納新;宋曉妍;袁靚
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所
• 代理人: 李桂存

1.一種檢測細菌毒素的納米增效糖基功能化分子印跡膜電極的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)?選擇能與細菌毒素合成糖基功能化分子印跡聚合物的功能單體；

(2)?將細菌毒素的模板分子、功能單體、交聯劑、致孔劑、引發劑和有機溶劑按一定摩爾比混合均勻，制成糖基功能化細菌毒素分子印跡聚合物溶液；

(3)?選取納米材料，按照現有方法制備出納米材料溶液；

(4)?利用電極表面修飾技術，將納米材料和糖基功能化細菌毒素分子印跡聚合物修飾到傳感器電極表面上；

所述功能單體為Α-D-吡喃糖基甘露糖、N-乙酰糖胺、N-乙酰乳糖胺、唾液酸神經節苷脂或神經酰胺三已糖苷；?

所述細菌毒素的模板分子、功能單體、交聯劑、致孔劑、引發劑和有機溶劑的摩爾比為0.1～2∶2.5∶0.1～5∶40～80∶0.01～0.10∶1.0～15。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述引發劑為偶氮二異丁腈；所述致孔劑為二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、異丙醇、四氯化碳、雜環化合物酰胺或砜類；所述有機溶劑為二氯甲烷或四氯化碳。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述納米材料溶液為碳納米管溶液、納米金溶液或納米鉑溶液。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述將納米材料和糖基功能化細菌毒素分子印跡聚合物修飾到傳感器電極表面包括以下步驟：

(1)?將工作電極表面用0.05?μm的氧化鋁粉打磨，超聲波清洗，再依次用1?mol/L?HNO₃，1?mol/L?NaOH清洗，然后用雙蒸水徹底清洗數次，吹干；

(2)?將制備的納米材料溶液超聲處理20-60min，得到分散的納米溶液；?

(3)?將工作電極表面浸泡于分散的納米溶液中5-10分鐘，取出晾干；

(4)?將步驟(3)中晾干的工作電極再浸泡于糖基功能化細菌毒素分子印跡聚合物溶液中5-10分鐘，然后取出用洗脫劑洗脫20-30分鐘，直至去除表面的模板分子，再于室溫下干燥5-10分鐘；

?(5)?重復步驟(3)和步驟(4)過程4-7次，制得所述糖基功能化分子印跡膜電極。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于還包括以下步驟：將制得的糖基功能化分子印跡膜電極浸入pH6.8-7.5緩沖液中，保存在4℃冰箱，12~24h后取出，用去離子水徹底清洗。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述洗脫劑為乙腈、水、甲醇-乙酸或乙腈-乙酸；所述緩沖液為檸檬酸-磷酸溶液。

7.一種檢測痕量細菌毒素的方法，其特征在于包括以下步驟：將按權利要求1~6任意一種方法制得的糖基功能化分子印跡膜電極連接到電化學工作站，對環境樣品提取液中的細菌毒素進行檢測。