[發明專利]麩質蛋白單克隆抗體的生產及其細胞株的應用

無效

• 申請號: 200910017430.3
• 申請日: 2009-07-30
• 公開（公告）號: CN101698832A
• 公開（公告）日: 2010-04-28
• 發明（設計）人: 高宏偉;陳穎;趙明;秦倩茹;梁成珠;林超
• 申請（專利權）人: 山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心;中國檢驗檢疫科學研究院;青島寶麥德生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/16;C12P21/08;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及麩朊蛋白的單克隆抗體雜交瘤細胞株及其用途，屬于食品的生物檢測技術領域。

背景技術

據FAO(1995)報告，90％以上的食品過敏是由蛋、奶、魚、甲殼類、花生、大豆、堅果類及小麥8類常見的過敏食物引起。麩質蛋白是谷物特別是小麥的主要過敏原，引起最常見的病癥是乳糜瀉——由于對麩質(面筋)不能耐受所致的慢性小腸吸收不良綜合癥。癥狀有頑固的腹瀉、體重下降、貧血、乏力、手足抽搐等。麩朊是引起乳糜瀉的主要原因。麩質蛋白主要存在于麥制品中，如面粉、餅干、飼料、含麥添加劑等，不過市場上有無麩小麥，專為乳糜瀉患者或其他特殊需要，當以區分。

麩朊(gliadin)，也稱醇溶蛋白，不溶于水及無水乙醇，但溶于70％～80％乙醇。麩朊這類蛋白主要存在于植物種子中，如玉米醇溶蛋白、麥醇溶蛋白等，在成熟小麥種子中，醇溶蛋白約占貯藏蛋白總量的40％，是組成面筋的重要蛋白質。分為四種亞型，α-，β-，γ-和ω-醇溶蛋白，分別占醇溶蛋白總量的25％、30％、30％和15％。

檢測過敏原麥醇溶蛋白的方法有ELISA、放射過敏原吸附實驗、對流免疫電泳法、組胺釋放試驗等。ELISA檢測靈敏度高、特異性和重復性好，但分析時間較長、商品化程度低。放射過敏原吸附實驗靈敏度高、準確性好，但是對人體血清具有依賴性，而人IgE抗體占血清比重小，抗體特異性也不確定，且特異結合能力不同，因此難標準化。對流免疫電泳法操作簡便、快速，但分辨力低、精確度不及ELISA。組胺釋放試驗靈敏度和特異性較高，但靈敏度與食品是否新鮮十分相關，組胺測定必須在抽血后24h之內完成，造成應用的局限性。根據各種方法的優缺點，綜合選擇ELISA檢測卵清蛋白。

目前，市面上已有醇溶蛋白檢測試劑盒，但大都是國外生產，價格高、運輸周期長。我們研制的醇溶蛋白ELISA檢測試劑盒，以自制的雜交瘤細胞株分泌的抗醇溶蛋白單克隆抗體包板，采用雙抗夾心法，可以定性或定量檢測醇溶蛋白。檢測靈敏度高、特異性好，價格低于國外，開創了國內生產醇溶蛋白檢測試劑盒的先例。

發明的內容

本發明要解決的技術問題是：提供一株麩朊蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞株及其分泌的單克隆抗體。

本發明要解決的另一個技術問題是：提供麩朊蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞株及其分泌的單克隆抗體在醫學檢驗領域的用途。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

麩朊蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞株，保藏編號為CCTCC-C200944。

一種由雜交瘤細胞株CCTCC-C200944分泌的單克隆抗體。

麩朊蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞株用于制備Gliadin單克隆抗體的用途。

一種由雜交瘤細胞株CCTCC-C200944分泌的單克隆抗體用于制備檢測Gliadin過敏原的試劑的用途。

麩朊蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞株2D8，于2009年6月17日保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：武漢大學，保藏編號為CCTCC-C200944，建議的分類命名為：雜交瘤細胞。

我們采用上述雜交瘤細胞制備了麩朊蛋白單抗。該單抗，可用于通過Elisa和免疫印記的方法檢測樣品中的Gliadin過敏原的含量。

本發明的優點是：1)染色體穩定，分泌IgG2a型抗體；2)分泌抗體效價高，直接培養上清可達到1∶10萬；3)小鼠腹水可達到1mg/mL；效價可達到1∶100萬。可以用protein?G純化；4)分泌抗體可以用于Elisa和免疫印跡(westernblot)實驗(1∶1000)。

下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步說明，并非對本發明的限定，依照本領域公知的現有技術，本發明的實施方式并不限于此，因此凡依照本發明公開內容所作為的本領域的等同替換，均屬于本發明的保護范圍。

圖1為單克隆抗體染色體分析結果。

具體實施方式

實施例1：制備雜交瘤細胞

材料和來源：

抗原：麩質蛋白(gliadin，Sigma)

動物：6-8周齡ABLB/c鼠(中國醫學科學院實驗動物所)

骨髓瘤細胞系：SP2/0(中國科學院典型培養物保存委員會細胞庫)

完全和不完全佐劑(SIGMA公司)

RPMI-1640基礎培養基、完全RPMI-1640培養基、HT培養基、HAT培養基(以上試劑均購自Gibico公司)

方法：

免疫動物：

采用攪拌混合法，將等體積的抗原溶液和佐劑均勻混合。