[發明專利]一種發酵制備除臭酶制劑的方法

有效

• 申請號: 200910015863.5
• 申請日: 2009-06-05
• 公開（公告）號: CN101565693A
• 公開（公告）日: 2009-10-28
• 發明（設計）人: 欒興社
• 申請（專利權）人: 欒興社
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;B01D53/48;B01D53/84;A61L9/01;C12R1/465;A61L101/54
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司
• 代理人: 王汝銀

1.一種發酵制備除臭酶制劑的方法，包括以下步驟：

1)液體種子制備

種子培養基的水溶液組成為：淀粉10-30g/L；(NH₄)₂HPO₄3-10g/L；K₂HPO₄0.4-1.5g/L；MgSO₄0.3-1.2g/L；CaCl₂0.2-1.2g/L；玉米漿0.2-2.0g/L；

制備方法：將水和按上述濃度稱取的以上各種原料加入配料容器中，攪拌加熱至各成分溶解，用NaOH溶液調pH值至7.0-7.4，裝入種子罐，在蒸汽壓力1Kg/cm²條件下滅菌30min，降溫使培養基冷卻至25-33℃，得滅菌種子培養基備用；

液體種子制備：每100L滅菌種子培養基接種50ml種齡5天的茄子瓶鏈霉菌DS-021孢子懸液進行攪拌培養，培養溫度為25-35℃，無菌空氣通風體積比1∶0.15-1∶0.55，攪拌轉速為150-350r/min，培養28-42h，得液體種子備用，所述的孢子懸液濃度為0.8×10⁸-1.2×10⁸個孢子/ml，所使用的茄子瓶規格為250ml；

2)發酵液制備

發酵培養基的水溶液組成：玉米粉15-40g/L；(NH₄)₂HPO₄?5-15g/L；K₂HPO₄?0.3-1.2g/L；MgSO₄?0.2-1.0g/L；CaCl₂?0.1-1.0g/L；玉米漿0.5-1.5g/L；

發酵培養基的制備：方法與種子培養基的制備步驟相同，將配制的發酵培養基裝入發酵罐；

發酵液制備：將重量比為5-15％的液體種子接入發酵罐進行攪拌培養，培養溫度為25-35℃，無菌空氣通風體積比1∶0.25-1∶0.85，攪拌轉速為120-250r/min，培養32-45h，得發酵液備用；

3)發酵液預處理

將發酵液升溫至65-85℃，保持10-25min后將溫度降至20-45℃，加入5-15ppm的聚氨基葡萄糖進行生物絮凝，去除菌體及其它雜質，得發酵清液備用；

4)產物提取與精制

(1)產物沉淀往發酵清液中先加入重量體積比為0.05％-0.35％的硅藻土攪拌5-15min，再加入重量體積比為0.05％-0.35％的丹寧攪拌5-15min，靜止20-60min后離心分離，得沉淀復合物；

(2)產物分離將沉淀復合物分散于5-8倍重量的水中，加入產物液量重量體積比為0.05％-0.35％的PVP，攪拌0.5-3h后離心分離，得酶清液備用；

5)成品制備

將酶清液用截留分子量為5000-50000的有機超濾膜進行濃縮，在濃縮液中加入穩定劑明膠，獲得液態酶制劑；把酶清液用噴霧干燥器干燥獲得粉末，在粉末中加入保護劑糊精，獲得固態酶制劑。