[發明專利]一種5-α還原酶抑制劑-蕁麻裂環木脂素苷A及其制備方法

無效

• 申請號: 200910012707.3
• 申請日: 2009-07-22
• 公開（公告）號: CN101671379A
• 公開（公告）日: 2010-03-17
• 發明（設計）人: 馮寶民;王恵國;史麗穎;王永奇
• 申請（專利權）人: 大連大學
• 主分類號: C07H15/26
• 分類號: C07H15/26;C07H1/08;A61K31/7048;A61P13/08
• 代理公司: 大連八方知識產權代理有限公司
• 代理人: 高 杰

技術領域

本發明涉及中藥生物活性成分的提取制備方法，具體涉及一種5-α還原酶抑制劑-蕁麻裂環木脂素苷A及其制備方法。

背景技術

蕁麻屬植物中含有大量的木脂素類成分，從中鑒定出了13個木脂素類化合物：(+)-新橄欖樹脂素、(-)-開環異落葉松脂素、異落葉松脂素、松醋醇、3，4-二香草基四氫吠喃、新橄欖樹脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、9-乙酰基-新橄欖樹脂素、9-乙酰基-新橄欖樹脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、9，9’-二乙酰基-新橄欖樹脂素、9，9’-二乙酰基-新橄攬樹脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、(-)-開環異落葉松脂素-9-O-β-D-葡萄糖苷、(-)-開環異落葉松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷、新橄欖樹脂素-9-O-β-D-葡萄糖苷。其結構類型主要有新橄欖樹脂素及其苷類和開環落葉松脂素、落葉松脂素及其苷類，其中新橄欖樹脂素及其苷類結構如下：

新橄欖樹脂素?新橄欖樹脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷

新橄欖樹脂素-9-O-β-D-葡萄糖苷?????????????????9-乙酰基-新橄欖樹脂素

9，9`-二乙酰基-新橄欖樹脂素、9-乙酰基-新橄欖樹脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷

9，9`-二乙酰基一新橄攬樹脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷???????????橄欖脂素

開環落葉松脂素、落葉松脂素及其苷類結構如下：

(-)-開環異落葉松脂素???????????????????(-)-開環異落葉松脂素-9-O-β-D-葡萄糖苷

(·)-開環異落葉松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷??????????????5-甲氧基開環異落葉松脂素

異落葉松脂素

有研究表明從大蕁麻根中分離到(+)-新橄欖樹脂素、(-)-開環異落葉松脂素、脫氫二松柏醇、異落葉松脂素、松脂醇和3，4-二香草基四氫呋喃，并檢驗了以上幾種物質體外與SBHG的親和作用，結果除松脂醇外，其余化合物都有親合力，其中3，4-二香草基四氫呋喃的親合作用最強，濃度為250μg/ml時抑制率為95％。提示大蕁麻根中木脂素類是治療BPH的活性成分之一。

本發明的課題組曾對國產的8種蕁麻屬植物根的不同提取物進行了抗前列腺增生的生物活性篩選，結果表明滇減蕁麻根的20％和95％乙醇提取物能顯著地抑制前列腺增生大鼠的病變組織。

發明內容

本發明的目的是在前期研究的基礎上，為了進一步研究提取物抗前列腺增生的活性部位和作用機理，選取前列腺組織中一個關鍵酶-5α-還原酶為作用靶點，采用酶聯免疫(Enzyme-linked?immunospecific?assay?ELISA)的方法，建立抑制5α-還原酶體外模型，從大鼠前列腺組織中提取5α-還原酶，與底物睪酮以及供氫體NADPH共同組成了一種微量反應體系，利用酶標儀檢測雙氫睪酮(DHT)的含量，以DHT的含量來判斷蕁麻提取物是否有抑制5α-還原酶的活性。

本發明從三角葉蕁麻中分離得到了蕁麻裂環木脂素苷A，該成分的結構不同于上述木脂素類成分，為一種新的裂環木脂素類成分，對抑制5α-還原酶作用研究發現具有較強活性，是一種潛在的抗前列腺增生藥物成分。

本發明的技術方案是：一種5-α還原酶抑制劑-蕁麻裂環木脂素苷A，其分子結構式如下：

上述的5-α還原酶抑制劑-蕁麻裂環木脂素苷A的制備方法是以三角葉蕁麻為原料，制備步驟如下：

(1)將三角葉蕁麻干燥地下部分粉碎處理后，用質量濃度為95％的工業乙醇回流提取，過濾后減壓濃縮；

(2)將醇提取物用50-90℃的水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，各萃取三次；

(3)正丁醇萃取物經大孔樹脂D101分離，采用質量濃度為30％的乙醇洗脫，收集洗脫液；

(4)乙醇洗脫液用硅膠柱色譜分離純化，采用體積比為氯仿∶甲醇＝30∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1的梯度洗脫，收集洗脫液；

(5)步驟(4)的洗脫液經反相硅膠柱色譜分離純化，采用體積比為甲醇∶水＝3∶7的溶液洗脫，每15-30ml收集成1份，收集第15-20份洗脫液，合并濃縮后得到蕁麻裂環木脂素苷A。

采用核磁共振(NMR)等波譜技術測定其結構，蕁麻裂環木脂素苷A的波譜數據見表1。