[發(fā)明專利]顯微切割標(biāo)本收集管清洗再利用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910012155.6
• 申請日: 2009-06-22
• 公開（公告）號: CN101587237A
• 公開（公告）日: 2009-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 齊瑞群;高興華;陳洪鐸
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: G02B21/34
• 分類號: G02B21/34;C11D1/08;C11D3/20;B08B3/08
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 郭元藝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及顯微切割標(biāo)本耗材清洗技術(shù)領(lǐng)域，具體的說是一種顯微切割標(biāo)本收集管清洗再利用方法。

背景技術(shù)

激光捕獲顯微切割(Laser?Capture?Microdissection)技術(shù)及其系統(tǒng)的出現(xiàn)，使得相關(guān)科研工作者可以精確分離待研究的目的組織標(biāo)本、細胞(體外培養(yǎng)的活細胞及固定在切片中組織細胞)、細胞器甚至染色體區(qū)帶，用于后續(xù)研究，其控制樣本的精確性受到全世界科研工作者的青睞，目前多數(shù)有實力的研究機構(gòu)均已配備此技術(shù)及相關(guān)設(shè)施。

用組織切片進行顯微切割時，需要用到一種專用的耗材，該耗材為帶蓋的管形容器(以下簡稱收集管)，其特征為收集管蓋的內(nèi)表面上攜帶表面光滑的特殊黏性模塊，利用模塊的黏性吸附力可收集顯微切割時膜性載玻片上被激光切割分離的帶有目標(biāo)組織的膜。這種收集管耗材價格非常昂貴；同時，由于用于研究的目的標(biāo)本需要富集足夠的數(shù)量，使得研究過程中該耗材使用數(shù)量較大，就單個標(biāo)本而言，DNA、RNA相關(guān)的基因水平研究一般需要2-3個，蛋白水平的甚至需要數(shù)十個。目前，國內(nèi)仍沒有制造商能夠生產(chǎn)這種專用耗材，重復(fù)利用該耗材不失為一個好方法。由于實驗過程中激光會燒灼黏性模塊表面致使出現(xiàn)焦痕，從而降低其黏附性；同時，粘在蓋子上的組織、核酸、蛋白及其他小分子物質(zhì)會在后續(xù)分子生物學(xué)實驗中造成污染。因此，如何能有效去除收集管管蓋上的組織、核酸、蛋白及其他小分子物質(zhì)，又不損傷收集管管蓋特殊黏性模塊的黏附性，且又能修復(fù)黏性模塊表面在實驗過程中被激光燒灼的焦痕，是重復(fù)利用該收集管的難題。常規(guī)機械洗滌、高溫高壓洗滌、強酸強堿洗滌等都會損傷收集管的黏附性，紫外線、鈷60照射也只能滅活微生物，不能清除小分子物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種能有效保持和修復(fù)收集管管蓋內(nèi)表面黏性模塊黏附性，且能有效去除殘留在收集管內(nèi)的組織、核酸、蛋白及其他小分子物質(zhì)，從而使收集管得以多次循環(huán)使用，節(jié)約大量實驗經(jīng)費的顯微切割標(biāo)本收集管清洗再利用方法。

為達到上述目的，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

顯微切割標(biāo)本收集管清洗再利用方法，可按如下步驟依次實施：

(1)向收集管中加入占收集管容積1/2～2/3的二甲苯，蓋上收集管管蓋，并振蕩2～5分鐘，打開管蓋，棄去二甲苯；

(2)向步驟(1)所述收集管中加入占收集管容積1/2～2/3的混懸液A，蓋上管蓋，并振蕩2～3分鐘，打開管蓋，倒空收集管；

(3)向步驟(2)所述收集管中加入占收集管容積1/2～2/3的雙蒸水，同時加入50mg直徑小于0.1mm的二氧化硅顆粒，蓋上管蓋，并振蕩2～3分鐘，打開管蓋，倒空收集管；

(4)依次重復(fù)步驟(2)及步驟(3)兩次；

(5)采用雙蒸水對步驟(4)所得收集管進行沖洗3～5分鐘；

(6)將收集管開蓋，置入2～8℃冰箱內(nèi)，直至收集管蓋及管內(nèi)液體完全蒸發(fā)；

(7)取出收集管，在超凈臺內(nèi)，往收集管管蓋內(nèi)表面黏性模塊表面涂抹濃度為4～8％的多聚賴氨酸，迅速將收集管放回冰箱，靜置；

(8)重復(fù)步驟(7)一次。

作為一種優(yōu)選方案，本發(fā)明所述混懸液A由鹽酸、酒精及EDTA混配，并加入50mg直徑小于0.1mm的二氧化硅顆粒制成。

作為另一種優(yōu)選方案，本發(fā)明所述鹽酸的濃度為1.5％；所述酒精的濃度為30％；所述EDTA的濃度為0.25mol/L。

進一步地，本發(fā)明所述鹽酸、酒精及EDTA的體積比為0.5～1.5∶(96.5～99)∶0.5～2。

更進一步地，本發(fā)明所述步驟(7)中靜置時間t≥24h。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下特點：

1、本發(fā)明整個操作流程中不涉及損傷暴力、高溫高壓、強酸堿等對膜有損害的因素；

2、本發(fā)明通過使用混懸液A，使黏性模塊得到充分清洗，同時充分保護了模塊的黏附性；

3、本發(fā)明通過往表面涂抹多聚賴氨酸，可以很好的修復(fù)激光在黏性模塊表面造成的燒痕，并在一定程度上恢復(fù)燒痕部位的黏附性；

4、本發(fā)明清洗后的收集管不含有對實驗有影響的成分；

5、本發(fā)明所需試劑均為生物實驗室常規(guī)試劑，且價格低廉，可批量操作；

6、本發(fā)明重復(fù)利用率高，可節(jié)省10-20倍的收集管數(shù)量，節(jié)省大量科研經(jīng)費。

附圖說明

下面結(jié)合附圖和具體實施方式對本發(fā)明作進一步說明。本發(fā)明的保護范圍不僅局限于下列內(nèi)容的表述。

圖1為驗證收集管是否清洗干凈而進行的2％的瓊脂糖電泳圖。

具體實施方式