[發明專利]一種基于金屬雜化介孔材料的磷酸化肽富集方法

無效

• 申請號: 200910011857.2
• 申請日: 2009-06-05
• 公開（公告）號: CN101906131A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發明（設計）人: 鄒漢法;張宇;陳晨;徐杰;吳仁安
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07K1/22
• 分類號: C07K1/22;C07K7/06;C07K7/08;C07K14/47
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳;周秀梅

1.一種基于金屬雜化介孔材料的磷酸化肽富集方法，其特征在于：

1)Ti-HMS的前處理：將5-20mg?Ti-HMS加入1-2ml的含有體積濃度10-80％ACN和1-10％TFA的混合溶液中，振蕩混勻后備用；

2)Ti-HMS對磷酸化肽分離富集

A.將蛋白酶解液樣品用含有體積濃度10-80％ACN和1-10％TFA的混合溶液稀釋至1-10pmol/μL；

B.取1μL稀釋后的蛋白酶解液，加入到25-100μL的步驟1)所獲得的Ti-HMS溶液中，振蕩離心后移去上清液，收集底部沉淀物；

C.底部沉淀物加入50-200μL含有體積濃度10-80％ACN和1-10％TFA的混合溶液中，混合溶液中含100-500mM?NaCl，振蕩離心后移去上清液，收集底部沉淀物；重復此步驟0-1次；

D.底部沉淀物再加入加入50-200μL含有體積濃度10-80％ACN和0-1％TFA的混合溶液中，振蕩離心后移去上清液，收集底部沉淀物；重復此步驟0-1次；

E.最后底部沉淀物用10-50μL質量濃度5-20％氨水超聲洗滌，離心后，收集上清液于離心管中凍干后保存。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述Ti-HMS的前處理詳細過程為：

A.稱取5-20mg?Ti-HMS加入1-2ml的含有體積濃度10-80％ACN和1-10％TFA的混合溶液中，振蕩離心后移走上清液；

B.再加入1-2ml去離子水，振蕩離心后移走上清液；

C.再加入1-2ml的含有體積濃度10-80％ACN和1-10％TFA的混合溶液中，振蕩離心后移走上清液；

D.再加入1-2ml的含有體積濃度10-80％ACN和1-10％TFA的混合溶液中，振蕩混勻后備用。

3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：所述金屬雜化介孔材料是以C12-C18有機伯胺為模板劑，正硅酸乙酯為硅源，鈦酸丁酯為金屬源，以上三者的質量比為1∶(0.06-0.65)∶(1.5-5.0)，通過溶膠-凝膠方法制得。

4.按照權利要求3所述的方法，其特征在于：具體制備過程如下，

1)取4-8g?C12-C18有機伯胺溶解于100g去離子水、15-25g乙醇和10-15g異丙醇混合液中，制得溶液A；

2)0.5-2.5g鈦酸丁酯、10-20g正硅酸乙酯和15-25g異丙醇組成溶液B；

3)在劇烈攪拌下，將溶液B滴加到溶液A中，2-6分鐘后加入1-3g三甲苯，陳化12-30小時，抽濾、洗滌沉淀，烘干，500-600℃焙燒5-7小時得最終材料。