[發明專利]LTB-羧甲基殼聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制備方法

無效

• 申請號: 200910010506.X
• 申請日: 2009-02-25
• 公開（公告）號: CN101530395A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發明（設計）人: 趙亮;蘇暢;馬洪林
• 申請（專利權）人: 趙亮
• 主分類號: A61K9/16
• 分類號: A61K9/16;A61K47/36;A61K39/39;A61K39/145;A61P31/16
• 代理公司: 錦州遼西專利事務所
• 代理人: 李 輝

1、一種LTB-羧甲基殼聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制備方法，其特征是：

1.1、取羧甲基殼聚糖溶液和氯化鈉溶液混合得混合水溶液，碳化二亞胺類化合物溶解于二甲基亞砜溶劑中，向混合水溶液中加入含有碳化二亞胺類化合物的二甲基亞砜溶液，攪拌30～60分鐘，4～8℃反應1～8小時，最終得混懸液，向混懸液中加入LTB的PBS緩沖液，pH6.5～.0，4～8℃反應1～8小時，加入甘氨酸反應1～4小時，反應液過硅膠柱，洗脫液：乙酸-水-丁醇，摩爾比為1：1～3：4～8，收集產物；用流動去離子水透析24～48小時，收集透析液的LTB-羧甲基殼聚糖交聯物，LTB、甘氨酸、碳化二亞胺類化合物、氯化鈉、羧甲基殼聚糖質量比為1：1～10：1～10：1～10：50～100；

1.2、取LTB-羧甲基殼聚糖交聯物溶解于PBS緩沖液中，pH6.5～8.0，將流感裂解疫苗和表面活性劑溶解在LTB-羧甲基殼聚糖交聯物PBS緩沖液中作為水相，流感裂解疫苗、表面活性劑與交聯物的質量比為1：10～50：100～500；

1.3、將第二步的水相加入到油相中，攪拌形成穩定的乳液；其中水相與油相的體積比為1：5～20，攪拌45～90分鐘，轉速為500～4000轉/分鐘；

1.4、向第三步制得的乳液中加入濃度為1～30％(w/v)的固化劑，乳液與固化劑溶液的體積比1：1～2，繼續攪拌1～3小時后停止；

1.5、離心分離第四步制得的分散體系，分出下層的微球，洗滌，真空干燥得到LTB-羧甲基殼聚糖流感疫苗微球。

2、根據權利要求1所述的LTB-羧甲基殼聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制備方法，其特征是：所述的碳化二亞胺類化合物是二乙基碳化二亞胺、二苯基碳化二亞胺、乙丙基碳化二亞胺或1-乙基-3(3，-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺。

3、根據權利要求1所述的LTB-羧甲基殼聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制備方法，其特征是：所述的表面活性劑是Span20、Span40、Span60、Span80、吐溫20、吐溫40、吐溫60或吐溫80。

4、根據權利要求1所述的LTB-羧甲基殼聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制備方法，其特征是：所述的油相是液體石蠟、花生油、玉米油、大豆油或橄欖油。

5、根據權利要求1所述的LTB-羧甲基殼聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制備方法，其特征是：所述的固化劑是甲醛、戊二醛、香草醛、三聚磷酸鈉、硫酸鈉或檸檬酸鈉。

6、根據權利要求1所述的LTB-羧甲基殼聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制備方法，其特征是：離心分離時分別用石油醚和蒸餾水依次充分洗滌，并在室溫下真空干燥。