[發明專利]一種酵母來源重組蛋白發酵液的雙水相固液分離方法

有效

• 申請號: 200910010281.8
• 申請日: 2009-01-24
• 公開（公告）號: CN101481403A
• 公開（公告）日: 2009-07-15
• 發明（設計）人: 修志龍;董悅生;賈茜;江波;田明玉;杜力;王志明;黃順軍;高健;王冀民;李梅彥
• 申請（專利權）人: 大連理工大學;華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 大連理工大學專利中心
• 代理人: 侯明遠

1.一種酵母來源重組蛋白發酵液的雙水相固液分離方法，其特征在于向酵母來 源的重組蛋白質發酵液中添加可溶性無機鹽和親水性有機溶劑并充分攪拌，通 過調節鹽、親水性有機物和發酵液的比例，調節體系的pH，控制操作溫度形成 雙水相，上相即為富含重組蛋白質的萃取相，下相為含菌體的萃余相；對萃取 相中的重組蛋白和有機溶劑以及萃余相中的無機鹽分別進行分離、回收；

加入的可溶性無機鹽占體系的質量份數為5～35％；加入親水性有機物占體 系的質量份數為5～40％；

可溶性無機鹽為磷酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽、鹵化物或其混合物；

親水性有機物為乙醇、甲醇、正丙醇、異丙醇、異丁醇、乙二醇或丙酮；

雙水相體系的pH值為3～13；靜置的時間為1～12小時；操作溫度為0～40℃。

2.根據權利要求1所述的一種酵母來源重組蛋白發酵液的雙水相固液分離方 法，其特征在于所述可溶性無機鹽為磷酸氫二鉀、磷酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、 氯化鈉、硫酸銨，硫酸鈉、硫酸鉀或其混合物。

3.根據權利要求1或2所述的一種酵母來源重組蛋白發酵液的雙水相固液分離 方法，其特征在于雙水相固液分離方法采用單級萃取，對于蛋白回收率小于80 ％的體系采用多級萃取。

4.根據權利要求1或2所述的一種酵母來源重組蛋白發酵液的雙水相固液分離 方法，其特征在于萃取相在蛋白回收后采用蒸餾、減壓蒸餾和/或精餾的方法進 行有機溶劑回收；萃余相通過加入無機酸或有機酸調節pH?1～9，加入醇或酮類 有機溶劑以及改變溫度的方法使加入的鹽析出而回收，加入有機溶劑與萃余相 之比為0.1～10∶1；溫度調節范圍為-4～30℃。

5.根據權利要求1或2所述的一種酵母來源重組蛋白發酵液的雙水相固液分離 方法，其特征在于所述重組蛋白質為重組白蛋白及其融合蛋白，重組轉鐵蛋白， 重組乳鐵蛋白和重組膠原蛋白及其融合蛋白。