[發(fā)明專利]一種甲酰肽受體激動劑篩選用微流控芯片組及篩選方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910010225.4
• 申請日: 2009-01-21
• 公開（公告）號: CN101782569A
• 公開（公告）日: 2010-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦建華;葉囡楠;林炳承
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號: G01N33/483
• 分類號: G01N33/483;G01N21/76
• 代理公司: 沈陽晨創(chuàng)科技專利代理有限責(zé)任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種甲酰肽受體激動劑篩選用微流控芯片組，其特征在于：該微流 控芯片組由三個功能化微流控芯片單元組成：

第一個功能化微流控芯片單元是細(xì)胞趨化檢測單元；

第二個功能化微流控芯片單元是受體內(nèi)吞檢測單元；

第三個功能化微流控芯片單元是鈣離子瞬間流動過程監(jiān)測單元；

所述細(xì)胞趨化檢測單元由2～99個相同的結(jié)構(gòu)單元組成，這些結(jié)構(gòu)單元 之間通過一個公共樣品池相連接；每個結(jié)構(gòu)單元由凝膠通道、細(xì)胞灌注通 道和細(xì)胞遷移通道組成；

所述受體內(nèi)吞檢測單元由細(xì)胞培養(yǎng)陣列、細(xì)胞灌注通道、化合物-量子 點(diǎn)灌注通道和沖洗液灌注通道組成；

所述鈣離子瞬間流動過程監(jiān)測單元由細(xì)胞培養(yǎng)室、細(xì)胞灌注通道、化 合物灌注通道和染料/沖洗液灌注通道組成。

2.按照權(quán)利要求1所述甲酰肽受體激動劑篩選用微流控芯片組，其特 征在于：所述細(xì)胞趨化檢測單元中的細(xì)胞遷移通道位于凝膠通道和細(xì)胞灌 注通道之間。

3.按照權(quán)利要求1所述甲酰肽受體激動劑篩選用微流控芯片組，其特 征在于：所述受體內(nèi)吞檢測單元中的細(xì)胞培養(yǎng)陣列位于受體內(nèi)吞檢測單元 的中心。

4.按照權(quán)利要求1所述甲酰肽受體激動劑篩選用微流控芯片組，其特 征在于：所述受體內(nèi)吞檢測單元中的細(xì)胞灌注通道位于受體內(nèi)吞檢測單元 的四周。

5.按照權(quán)利要求1所述甲酰肽受體激動劑篩選用微流控芯片組，其特 征在于：所述受體內(nèi)吞檢測單元中的細(xì)胞培養(yǎng)陣列由2～99個細(xì)胞培養(yǎng)室相 互串聯(lián)作為一列，2～99列相互并聯(lián)構(gòu)成陣列式細(xì)胞培養(yǎng)模塊，每兩列的入 口和出口均逐級相互連接，最終連接成一個入口和一個出口通道；入口通 道的末端有兩個分支，分別與化合物-量子點(diǎn)通道和沖洗液通道相連接，出 口通道的末端與細(xì)胞灌注通道相連接。

6.按照權(quán)利要求1或5所述甲酰肽受體激動劑篩選用微流控芯片組，其 特征在于：所述的細(xì)胞培養(yǎng)陣列每一列細(xì)胞培養(yǎng)室的個數(shù)相同，并且每兩 列細(xì)胞培養(yǎng)室由微通道相連接，這些微通道再每兩個互相連接，最終連接 成一個通道。

7.按照權(quán)利要求1所述甲酰肽受體激動劑篩選用微流控芯片組，其特 征在于：所述鈣離子瞬間流動過程監(jiān)測單元中的細(xì)胞培養(yǎng)室與細(xì)胞灌注通 道相連。

8.一種基于權(quán)利要求1所述微流控芯片組的甲酰肽受體激動劑篩選方 法，其特征在于方法過程為：

進(jìn)行細(xì)胞趨化分析：首先向凝膠通道內(nèi)緩慢注入液態(tài)基底膜樣物質(zhì) BME，當(dāng)在顯微鏡下看到BME快要充滿整個凝膠通道時，立即停止注入， 細(xì)胞趨化檢測單元靜置后，依次加入50%乙醇、磷酸鹽緩沖液PBS和細(xì)胞 培養(yǎng)基，細(xì)胞趨化檢測單元置于37℃，使BME完全固化，利用細(xì)胞灌注 通道兩端儲液池中液面高度差所產(chǎn)生的靜壓力將細(xì)胞引入灌注通道，細(xì)胞 趨化檢測單元放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中，待細(xì)胞貼壁后，取出細(xì)胞趨化檢測單元 拍照，記錄遷移通道內(nèi)初始細(xì)胞個數(shù)，向基底膜/化合物入口加入備選化合 物，細(xì)胞趨化檢測單元在培養(yǎng)箱中靜置后拍照，記錄遷移通道內(nèi)終了細(xì)胞 個數(shù)；

進(jìn)行甲酰肽受體內(nèi)吞分析：將細(xì)胞懸液由細(xì)胞入口注入受體內(nèi)吞檢測 單元，待細(xì)胞均勻進(jìn)入各微培養(yǎng)室并沉降后，將受體內(nèi)吞檢測單元放入培 養(yǎng)箱中過夜，細(xì)胞充分貼壁并伸展，將標(biāo)記了量子點(diǎn)的先導(dǎo)化合物溶液引 入受體內(nèi)吞檢測單元，對細(xì)胞進(jìn)行刺激，將洗滌液引入受體內(nèi)吞檢測單元 對細(xì)胞進(jìn)行沖洗，最后將受體內(nèi)吞檢測單元置于熒光顯微鏡下成像；

進(jìn)行鈣離子瞬間流動過程監(jiān)測：細(xì)胞懸液由細(xì)胞入口注入鈣離子瞬間 流動過程監(jiān)測單元，待細(xì)胞沉降后將鈣離子瞬間流動過程監(jiān)測單元放入培 養(yǎng)箱中過夜，細(xì)胞充分貼壁并伸展，向鈣離子瞬間流動過程監(jiān)測單元注入 Hank’s?balanced?salt?saline溶液洗滌細(xì)胞兩次，加入鈣離子熒光染料孵育， 再向鈣離子瞬間流動過程監(jiān)測單元注入HBSS溶液洗滌細(xì)胞兩次，鈣離子 瞬間流動過程監(jiān)測單元置于熒光顯微鏡下，打開激發(fā)光源后立刻對細(xì)胞施 加化合物刺激，并開啟CCD快門，記錄細(xì)胞內(nèi)鈣離子瞬間流動過程。