[發明專利]透明質素合成酶基因及其表達

有效

• 申請號: 200910006838.0
• 申請日: 2002-06-13
• 公開（公告）號: CN101709285A
• 公開（公告）日: 2010-05-19
• 發明（設計）人: P·L·德安格里斯;P·H·威格爾;K·庫馬里
• 申請（專利權）人: 俄克拉何馬大學董事會
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12R1/10;C12R1/125;C12R1/07
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.一種產生透明質酸的重組宿主細胞，其中重組宿主細胞是包含重組載體的枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌細胞，該重組載體包含編碼SEQ?ID?NO：12所示透明質素合成酶的純化核酸區段，其中純化核酸區段是在啟動子的控制之下的。?

2.權利要求1的重組宿主細胞，其中純化核酸區段由根據SEQ?ID?NO：11的核苷酸序列組成。?

3.權利要求1的重組宿主細胞，其中編碼透明質素合成酶的純化核酸區段是在革蘭氏陽性細菌相容性啟動子的控制之下的。?

4.權利要求3的重組宿主細胞，其中啟動子是芽孢桿菌相容性啟動子。?

5.權利要求1的重組宿主細胞，其中枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌細胞進一步包含重組載體，該重組載體包含編碼酶活性UDP-GlcUA生物合成途徑的酶的純化核酸區段，其中酶活性UDP-GlcUA生物合成途徑的酶選自UDP-葡萄糖脫氫酶、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶及其組合。?

6.一種生產透明質酸的方法，該方法包含以下步驟：?

將編碼SEQ?ID?NO：12所示透明質素合成酶的純化核酸區段引入枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌宿主中，其中純化核酸區段是在啟動子的控制之下的；?

使宿主在培養基上生長以分泌透明質酸；和?

回收分泌的透明質酸。?

7.根據權利要求6的方法，其中回收透明質酸的步驟包含從培養基中提取分泌的透明質酸。?

8.根據權利要求7的方法，該方法進一步包含對提取的透明質酸?進行純化的步驟。?

9.一種生產透明質酸的方法，該方法包含以下步驟：?

將編碼SEQ?ID?NO：12所示透明質素合成酶的純化核酸區段引入枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌宿主中，其中純化核酸區段是在啟動子的控制之下的；?

將編碼酶活性UDP-葡萄糖脫氫酶的純化核酸區段引入枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌宿主中；?

使枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌宿主在培養基上生長以分泌透明質酸；和?

回收分泌的透明質酸。?

10.權利要求9的方法，其中在引入編碼酶活性透明質素合成酶的純化核酸區段的步驟中，該純化核酸區段由根據SEQ?ID?NO：11的核苷酸序列組成。?

11.權利要求9的方法，其中編碼酶活性透明質素合成酶的純化核酸區段和編碼酶活性UDP-葡萄糖脫氫酶的純化核酸區段是在相同啟動子的控制之下的。?

12.權利要求9的方法，其中編碼酶活性透明質素合成酶的純化核酸區段和編碼酶活性UDP-葡萄糖脫氫酶的純化核酸區段是在不同啟動子的控制之下的。?

13.根據權利要求9的方法，其中回收透明質酸的步驟包含從培養基中提取分泌的透明質酸。?

14.根據權利要求13的方法，該方法進一步包含對提取的透明質酸進行純化的步驟。?

15.權利要求9的方法，其中在將編碼酶活性透明質素合成酶的純化核酸區段引入到枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌宿主的步驟中，該編?碼酶活性透明質素合成酶的純化核酸區段是在革蘭氏陽性細菌相容性啟動子的控制之下的。?

16.權利要求15的方法，其中啟動子是芽孢桿菌相容性啟動子。?

17.一種產生透明質酸的重組宿主細胞，其中該重組宿主細胞是枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌細胞，該細胞包含：?

包含純化的核酸區段的重組載體，該純化的核酸區段編碼SEQ?ID?NO：12所示乳房鏈球菌透明質素合成酶；和?

包含純化的核酸區段的重組載體，該純化的核酸區段編碼酶活性UDP-葡萄糖脫氫酶的編碼區。?

18.權利要求17的重組宿主細胞，其中編碼SEQ?ID?NO：12所示乳房鏈球菌透明質素合成酶的純化核酸區段是在革蘭氏陽性細菌相容性啟動子的控制之下的。?

19.權利要求18的重組宿主細胞，其中啟動子是芽孢桿菌相容性啟動子。?