[發明專利]用于檢測呂氏泰勒蟲和尤氏泰勒蟲及羊梨形蟲檢測膜

無效

• 申請號: 200910001482.1
• 申請日: 2009-01-07
• 公開（公告）號: CN101550446A
• 公開（公告）日: 2009-10-07
• 發明（設計）人: 殷宏;羅建勛;牛慶麗;關貴全;馬米玲;劉愛紅;劉志杰;高金亮;黨志勝;李有全;任巧云;劉軍龍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司
• 代理人: 張 晉

1、一種用于檢測呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲和羊梨形蟲的DNA檢測膜，其特征是在Biodyne?C薄膜上固定有呂氏泰勒蟲和尤氏泰勒蟲的特異性寡核苷酸。

2、根據權利要求1所述的用于檢測呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲和羊梨形蟲的DNA檢測膜，其特征是在Biodyne?C薄膜上還固定有巴貝斯蟲特異性寡核苷酸和泰勒蟲通用特異性寡核苷酸。

3、根據權利要求2所述的用于檢測呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲和羊梨形蟲的DNA檢測膜，其特征在于在Biodyne?C薄膜上固定的呂氏泰勒蟲特異性寡核苷酸序列為atcttctttttgatgagttg，固定的尤氏泰勒蟲特異性寡核苷酸序列為tgcattttccgagtgttact，固定的羊梨形蟲特異性寡核苷酸序列為ctgtcagaggtgaaattct，固定的巴貝斯蟲特異性寡核苷酸序列為ccttggtaatggttaataggaa，固定的羊巴貝斯蟲未定種特異性寡核苷酸序列為cgggtttcgtctacttcgc，固定的莫氏巴貝斯蟲特異性寡核苷酸序列為gaatgatgccgacttaaaccct。

4、權利要求1所述的用于檢測呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲和羊梨形蟲的DNA檢測膜的制備方法，其特征是分別人工合成出呂氏泰勒蟲和尤氏泰勒蟲的特異性寡核苷酸，將所得到的各寡核苷酸5′端用氨基團修飾，再將其分別共價結合到帶有負電荷的Biodyne?C薄膜上。

5、權利要求2或3所述的用于檢測呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲和羊梨形蟲的DNA檢測膜的制備方法，其特征是分別人工合成出巴貝斯蟲特異性寡核苷酸、泰勒蟲通用特異性寡核苷酸及呂氏泰勒蟲和尤氏泰勒蟲的特異性寡核苷酸，將所得到的各寡核苷酸5′端用氨基團修飾，再將其分別共價結合到帶有負電荷的Biodyne?C薄膜上。

6、采用權利要求1至3所述的任一檢測膜檢測呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲和羊梨形蟲的方法，其特征是以待檢測羊血提取的DNA模板，在泰勒蟲和巴貝斯蟲18S?rRNA基因序列V4高變區兩端的保守區域設計一對擴增出的片段大小為480bp-491bp的引物，其中一條引物用生物素標記，然后進行PCR擴增，獲得生物素標記的PCR產物，生物素標記的PCR產物和固定在Biodyne?C膜上的泰勒蟲和巴貝斯蟲的寡核苷酸進行雜交，再經增強化學發光孵育后將雜交后的膜放置曝光儲片夾內，在薄膜上放X光膠片進行曝光，再對膠片進行顯影和定影處理，根據膠片上產生的強度信號確定被檢羊是否有患有相應的疾病。