[發明專利]對阿爾茨海默氏癥的新一代基因療法·免疫療法的開發

無效

• 申請號: 200910001132.5
• 申請日: 2009-01-23
• 公開（公告）號: CN101491683A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: 島田勝;奧田研爾;浜島健治;高橋透
• 申請（專利權）人: 浙江海正藥業股份有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P25/28;C12N15/63;C12N15/861
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司
• 代理人: 黃澤雄;崔 華

技術領域

本發明涉及一種能用于阿爾茨海默氏癥的基因療法·免疫療法的導入了抗β-淀粉樣蛋白的抗體基因或其改良型的載體。

背景技術

人類阿爾茨海默病(AD)的主要病理特征有老年斑和神經纖維改變，一旦它們進一步發展，則可觀察到神經細胞的減少和腦萎縮。眾所周知老年斑是由于從細胞膜上的受體淀粉樣前體蛋白(APP)切斷出的β-淀粉樣蛋白(Aβ)的積累所造成。此外，近年來，不僅是不溶性Aβ，可溶性Aβ聚集體的神經細胞毒性也被確認，引起了極大的關注(非專利文獻1)。在日本得到批準的一種AD治療藥，只是一種膽堿酯酶抑制劑的前體，該藥物彌補損失的神經傳輸，只抑制癥狀，但達不到根治。

因此，為了達到減少造成AD根本原因的Aβ為目的，設想把自身的Aβ蛋白質依靠抗體除去的“Aβ疫苗療法”(非專利文獻2)。該疫苗療法是把合成的Aβ42肽與佐劑一起肌肉給藥。在2001年，這種疫苗的臨床試驗(II期)已經開始。結果證實了老年斑消失，確認具有一定的作用，但另一方面也確認了有6％的患者發生了腦膜腦炎的副作用，有1例患者死亡。由于這種副作用的出現，臨床試驗被停止。目前，疫苗的副作用被認為是兩個原因。其一認為給藥的Aβ抗體激活了小神經膠質細胞，也許這與腦膜腦炎相關聯。另一個認為由于疫苗中所含的佐劑中具有強的免疫激活作用，而引起T細胞等細胞性免疫，結果在一些患者中反應Aβ及APP反應性Th1型CD4⁺T細胞滲透到腦中，這一事實也許與腦膜炎相關(非專利文獻3)。因此，開發安全性高且能有效地減少Aβ的疫苗是所期望的。

Tamura等，用經合成的Aβ肽免疫的小鼠，制備產生針對Aβ的各個表位的抗體的雜交瘤細胞(非專利文獻4)。把雜交瘤細胞生產的抗體用胃蛋白酶切斷，除去與激活小神經膠質細胞相關的Fc區域，純化出F(ab’)2。把這個抗AβF(ab’)2抗體隔一周給藥到Aβ抗體過量表達的AD模型小鼠(Tg2576)的腹腔中，進行AD預防和治療效果的研究。使用該抗體后，根據小鼠大腦切片的免疫染色，證實老年斑消失。此外，用sandwich?ELISA法，對可溶性·不溶性的腦內Aβ定量的結果確定腦內Aβ由于抗體而減少。根據以上內容，通過Fc受體而不通過細胞吞噬，成功地清除了Aβ。然而，通過被動免疫進行的療法，為了有持續的效果必須不斷地加入抗體，這是Tamura課題研究的一個難點。

此外，據報道，把帶有編碼抗Aβ輕鏈抗體的腺相關病毒投入AD模型小鼠腦內，淀粉樣蛋白的沉積減少，而且即使在給藥一年后還觀察到抗Aβ輕鏈抗體的表達(非專利文獻5)。不過，一般來說，輕鏈抗體和完整的抗體的比較，抗體能力要低。

[非專利文獻1]

Rakez?Kayed?et?al，.Science(2003)300：486-489

[非專利文獻2]

Dale?Schenk?et?al.，Nature(1999)400：173-177

[非專利文獻3]

James?A.R.Nicoll?et?al.，Nature?med(2003)9：448-452

[非專利文獻4]

Y.Tamura?et?al.，Neurobiology?of?Disease?20(2005)541-549

[非專利文獻5]

K.Fukuchi?et?al.，Neurobiology?of?Disease?23(2006)502-511

發明內容

本發明目標是使比抗體給藥功效更持續、比單抗體更高的抗體強度的阿爾茨海默氏病的基因治療和免疫治療成為可能。

因此，要解決上述問題，本發明第一，著眼于可以期待長期基因表達的腺相關病毒(AAV)。由于AAV可以在細胞中可以穩定地基因表達，因此即使單次給藥也可以預期具有長期的功效。此外，AAV已經對囊腫性纖維化，血友病和其他的疾病進行臨床研究，作為安全性很高的基因治療的載體被廣泛使用。此外，由于不需要佐劑，可以期望病毒載體或許能抑制Th1型CD4⁺T細胞活化。其次，注意AAV的血清類型。根據發明者的長年關于AAV載體研究的實際成果，清楚了不同血清型的腺相關病毒載體對細胞的親和性不同。本發明者決定使用在肌肉細胞表達效率最高的AAV?1型載體。