[發明專利]東方伊薩酵母菌株及其制備方法,以及用該菌株制備木糖醇、乙醇的方法

無效

• 申請號: 200910000577.1
• 申請日: 2009-01-16
• 公開（公告）號: CN101805701A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發明（設計）人: 張厚瑞;覃香香;蔡愛華;周玉恒;陳海珊
• 申請（專利權）人: 唐傳生物科技(廈門)有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P19/02;C12P7/10;C12R1/74;C12R1/645
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 李雁翔

1.一種微生物菌株，其特征在于，所述微生物菌株為東方伊薩酵母Issatchenkia?orientalis(S-7)，CCTCC?NO：M206098。

2.根據權利要求1所述的微生物菌株，其特征在于，所述微生物菌株的26SrDNA?D1/D2區域核苷酸特征序列與GenBank登記號為EF030708的特征序列同源性為100％。

3.一種用于權利要求1或者2所述的微生物菌株的制備方法，其特征在于，所述方法包括下列步驟：

S1.用蔗渣半纖維素水解物為分離培養基的基本成分，適當真空后用堿調節pH?5-6，如果制成平板，外加瓊脂20g/L作為固形劑；

S2.從紙漿廠廢水污染的環境采集的土壤、淤泥作分離樣品，250ml三角瓶裝量25ml，接入廢水或淤泥分離樣品約1g，30℃，200rpm搖瓶富集培養72h；

S3.取有菌體生長的培養液在同一培養基平板上劃線分離，選擇能夠快速生長的類型，轉到斜面保存；

S4.斜面培養物轉移到半纖維稀酸水解物中并在搖瓶條件下培養24小時，離心除去菌體，然后接入能夠同化木糖的酵母菌株進行發酵，選留那些能夠有效改善半纖維素稀酸水解物發酵性能的脫毒活性菌株；

S5.按照上述步驟經過十個以上批次的樣品分離，獲得改善半纖維素水解物發酵性能活性最強的一個分離物S-7；

S6.把按照上述步驟分離得到的菌株S-7于4℃冷藏或用凍干法保藏。

4.一種用于權利要求1或者2所述的微生物菌株的半纖維素水解物生物脫毒種子液制備方法，其特征在于，所述種子液制備方法包括如下步驟：

S1.制備培養基，所述培養基的組成為：葡萄糖50g/L，MgSO₄.7H₂O2g/L，K₂HPO₄?4g/L，KH₂PO₄?6g/L，酵母膏5g/L；

S2.將CCTCC?NO：M206098的斜面培養物接入液體種子培養基，裝液量為搖瓶容量的20％；

S3.在27--30℃，轉速200rmp條件下搖床培養12～18小時，獲得可用于脫毒的種液。

5.用權利要求1或者2所述的菌株制備木糖醇的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.經過CCTCC?NO：M206098發酵脫毒過的半纖維素水解物，真空濃縮至木糖約150g/L，氨水調節至pH＝6，另加入酵母膏5g/L，得到用于木糖醇發酵的半纖維素水解物培養基

S2.木糖醇發酵用搖瓶進行，搖瓶裝量10％，按5％(v/v)接種量接入熱帶假絲酵母(Candida?tropicalis)CCTCC?NO：M205067種子液，200rmp，33℃進行發酵至木糖消耗完；

S3.收集離心沉淀的菌體，投入到新鮮的半纖維素水解物培養基中繼續新一輪的木糖醇發酵，離心上清液制備木糖醇。

6.用權利要求1或者2所述的菌株對半纖維素水解物進行同步脫毒發酵生產木糖醇的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.真空濃縮半纖維素水解物至木糖含量約100--150g/L，用堿(氫氧化鈣，或氨水)調至pH?3--pH7，離心或過濾除去沉淀，加入酵母膏5g/L，得半纖維素水解物培養基；

S2.取培養好的CCTCC?NO：M206098種子液，與等體積的CCTCC?NO：M205067種子液混合，然后按5％(v/v)和用種量接入半纖維素水解物中，搖瓶培養至木糖消耗完；

S3.離心收集沉淀的酵母細胞并用于新鮮的培養基中，繼續同步脫毒發酵。如此不斷地循環，直至酵母細胞不能利用。

7.用權利要求1或者2所述的菌株對半纖維素水解物進行同步脫毒發酵生產乙醇的方法，其特征在乎，包括如下步驟：

S1.真空濃縮半纖維素水解物至木糖含量約100--150g/L，用堿(氫氧化鈣，或氨水)調至pH?3--pH7，離心或過濾除去沉淀，加入酵母膏5g/L，得半纖維素水解物培養基；

S2.取培養好的CCTCC?NO：M206098種子液，與等體積的CICC?1770種子液混合，然后按5％(v/v)和用種量接入半纖維素水解物培養基搖瓶中，培養至木糖消耗完；

S3.離心收集沉淀的酵母細胞循環用于發酵新鮮的培養基，繼續同步脫毒發酵，如此不斷地循環，直至酵母細胞不能利用；

S4.蒸餾回收離心上清液中的乙醇。