[發明專利]一種雙特異性寡肽-力達霉素強化融合蛋白Ec-LDP-Hr-AE

有效

• 申請號: 200910000090.3
• 申請日: 2009-01-07
• 公開（公告）號: CN101497666A
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發明（設計）人: 郭曉芳;甄永蘇;商悅;金蓮舫
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫藥生物技術研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K38/16;A61P35/00
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所
• 代理人: 楊 厚;王 為

技術領域：

本發明涉及一種新型抗腫瘤靶向藥物及其制備方法和應用。

背景技術：

惡性腫瘤是威脅人類健康的多發病和常見病，已經位居人類疾病中三大主要 死亡原因之首。傳統的腫瘤化學治療，由于靶向性不明確、選擇性不強、特異性 不高和極易產生耐藥等，導致其存在殺傷腫瘤細胞的同時損害正常組織細胞，影 響療效和生存期等缺陷。靶向性治療則可克服傳統化療的不足，提高抗腫瘤治療 的效果。在靶向性治療中，單克隆抗體發揮了重要的作用，然而單抗存在對實體 腫瘤滲透能力差的缺點。因此，采用小分子寡肽配體取代單抗的作用，已成為靶 向藥物的一個發展方向。

表皮生長因子受體EGFR(或稱HER1)、HER2、HER3和HER4都是跨膜 受體酪氨酸激酶家族(ErbB)的成員。該家族成員有著相似的結構，均由胞外 配體結合結構域、胞內激酶結構域和跨膜結構域組成。當配體與受體結合后，可 導致受體發生同二聚化或異二聚化，從而激活受體的酪氨酸激酶活性，進而活化 一系列的胞內信號通路，最終促進細胞的生長、增值、分化和遷移。EGF是EGFR 的天然配體，以EGF或抗EGFR的單克隆抗體為導向分子構成的融合蛋白，能 夠通過EGFR介導的內吞作用而進入EGFR表達的腫瘤細胞，從而發揮特異性 殺傷作用。EGF由53個氨基酸組成，與受體結合的區段位于其C環。HER2 目前還未發現其天然配體，但在發生二聚化時，它是其他受體優先選擇的對象。

ErbB受體家族與人類癌癥的關系非常密切，尤其是EGFR和HER2。ErbB 受體發生改變的腫瘤通常更具有侵襲性，而且病人往往也預后不良。例如：在 25-30％的乳腺癌中HER2基因呈高表達，在非小細胞肺癌和頭頸部腫瘤中EGFR 大量表達或發生突變等，這就使得EGFR和HER2成為很有前景的腫瘤治療靶點。 目前臨床使用的靶向ErbB受體的藥物主要可分為兩類：一類是單克隆抗體，用 于結合受體的胞外結構域；另一類是小分子的酪氨酸激酶抑制劑，其機制是競爭 性地結合酪氨酸激酶結構域的ATP結合位點。這些藥物單獨使用或者與其他化 療藥物聯合應用均獲得了較好的療效，但耐藥性問題仍然比較突出。

研究顯示，EGFR和HER2是協同發揮作用的，共同導致NIH?3T3細胞的癌 變，而單獨的任何一個受體都不足以引起細胞的轉化。另一些研究也表明，在其 他受體配基存在的情況下，靶向于某一ErbB受體的抗腫瘤藥物的效果會被抵消。 此外，一些臨床前的體內外研究也顯示，對ErbB受體的雙重抑制要比單獨靶向 一個受體的抗腫瘤效果好。

力達霉素(Lidamycin，LDM)也稱C-1027，是從我國湖北省潛江縣土壤中 分離得到的一株鏈霉菌(Streptomyces?globisporus，菌種保藏號：CGMCC?No.0704) 產生的烯二炔類抗生素，是迄今報道過的對腫瘤細胞殺傷作用最強的大分子肽類 抗腫瘤抗生素。體內動物試驗表明，LDM對小鼠結腸癌26有非常顯著的療效， 對人肝癌Bel-7402和盲腸癌Hce-8693等多種人移植瘤均有較好療效[中國抗生 素雜志1994，19(2)：164-168]。LDM由輔基蛋白(LDP)和烯二炔結構的發色 團(AE)兩部分組成，發色團是力達霉素分子的活性部分，輔基蛋白對發色團起穩 定保護作用。LDM的發色團和輔基蛋白系通過非共價鍵結合，因而可在體外將 其拆分與重建。LDM以其獨特的分子結構，成為構建新型導向藥物的理想“彈 頭”[中國醫學科學院報2001，23(6)：563-567]。

小型化和高效化，是解決當前單抗治療劑所遇難點的重要途徑。本發明的目 的，是以靶向EGFR和HER2的兩個寡肽Ec、Hr為導向分子，以LDM為“彈 頭”，制備雙特異性強化融合蛋白。該強化融合蛋白在體外對腫瘤細胞有強烈的 殺傷作用，體內試驗對人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤療效顯著。本發明所說的 雙靶點強化融合蛋白Ec-LDP-Hr-AE，迄今為止尚未見有相關報道。

發明內容：