[發明專利]透明質酸的制備方法

有效

• 申請號: 200880130427.6
• 申請日: 2008-07-25
• 公開（公告）號: CN102124120A
• 公開（公告）日: 2011-07-13
• 發明（設計）人: 橋本正道;架間晃明;藤井健治;池見昌久
• 申請（專利權）人: 電氣化學工業株式會社
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C08B37/00
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

技術領域

本發明涉及利用微生物制備透明質酸的方法。

背景技術

透明質酸除作為化妝品的保濕劑外，還在眼科、整形外科、皮膚科等領域中作為藥品來使用。透明質酸能夠用來自動物組織例如雞的雞冠、牛眼的玻璃體等的提取物進行制備，但由于混入作為夾雜物的硫酸軟骨素等或者因組織內所含有的透明質酸酶等而易于被低分子量化，因此有人提出了通過培養具有透明質酸生產能力的微生物，由培養液制備透明質酸的方法(發酵法)(專利文獻1)。與提取法相比，由發酵法制備的透明質酸是通過一定的原料、一定的方法進行制備的，因此，能夠保持一定的產品品質，因而在產業上的利用價值較大。

而且，以工業透明質酸的生產為目的，有人開發出了使用了用于發酵法的含有各種培養基成分的培養基的發酵法(專利文獻2-4)。專利文獻2中記載了：使用對8種氨基酸進行了增量的培養基的發酵法，其中，上述8種氨基酸是作為透明質酸生產中的有效成分，是繁殖所必須的氨基酸。此外，專利文獻3中記載了：使用對精氨酸和/或谷氨酸進行了增量的培養基的發酵法。此外，專利文獻4中記載了：使用對精氨酸進行了增量的培養基的發酵法。

專利文獻1：日本特公平4-12960號公報

專利文獻2：日本特開平7-46992號公報

專利文獻3：日本特開昭62-289198號公報

專利文獻4：日本特開昭63-141594號公報

發明內容

但是，就現有的適合培養法的大多數培養基而言，其成分數較多，培養基配制繁雜，且從培養基分離和純化透明質酸也較復雜等，因而作為工業生產方法期望進一步改善。此外，關于其他的現有技術方法，作為工業生產方法也期望進一步改善。

本發明鑒于上述情況而完成，其目的在于提供以高收率簡單地制備透明質酸的方法。此外，其目的還在于提供在短時間內制備透明質酸的方法。

本發明人為解決上述目的而進行了專心研究，結果發現：在培養的特定時期，將精氨酸和谷氨酰胺組合并添加到培養液中，由此改善透明質酸的生產，從而完成了本發明。

即，根據本發明，提供包括如下工序的透明質酸的制備方法：培養具有透明質酸生產能力的微生物；以及在該微生物的對數增殖期后期，在培養液中添加谷氨酰胺和精氨酸。根據該制備方法，在培養的特定時期將精氨酸和谷氨酰胺組合并添加到培養液中，能夠在短時間內以高收率簡單地制備透明質酸。

根據本發明的透明質酸的制備方法，通過在培養具有透明質酸生產能力的微生物的特定時期將精氨酸和谷氨酰胺組合并添加到培養液中，能夠在短時間內以高收率簡單地制備透明質酸。

附圖說明

圖1是在培養用于生產透明質酸的微生物時的、培養液中的氨基酸濃度的曲線圖。

圖2是將一并添加了精氨酸的情況和后添加精氨酸的情況進行比較的曲線圖，左側的曲線圖表示菌體濃度的隨時間變化，右側的曲線圖表示粘度(透明質酸濃度的指標)的隨時間變化。

具體實施方式

術語說明

本說明書中的“對數增殖期后期”是指微生物充分增殖后的狀態，具體指對數增殖期的后半期至靜止期(穩定期)。另外，“對數增殖期”是指在微生物的培養過程中，微生物每隔一定時間通過分裂進行增殖時細胞數的對數與時間呈線性關系的時期。對數增殖期的后期可由本領域技術人員采用已知的、任意的指標或方法進行判斷。本發明并不簡單地限于此，例如，也可以濁度或比增殖速度為指標進行判斷。

本說明書中的“濁度”是通過培養液的渾濁情況(培養液中的菌體量)測定微生物增殖的、最普通簡便且快速的測定方法。對培養液進行光照射并測定透射光由于散射及吸收而被阻抑的情況。用于生產透明質酸的微生物是微粒子，因此，微生物的量與培養液的濁度間存在正比關系。例如，濁度可進行如下測定。

向培養液入射波長為660nm的單波長的光，通過分光光度計測定透射光。這里，將入射光和透射光的強度分別設為I₀、I，將透射層的厚度設為L，將吸光度設為τ，并將通過下式求出的吸光度定義為培養液的濁度(OD)。

[公式1]

I＝I₀Exp(-τL)

另外，當培養前的培養基本身具有無法忽視的濁度時，可以從培養液的濁度減去對照培養基的濁度。

作為本說明書中的對數增殖期后期，采用培養液的濁度在660nm光波長條件下顯示為0.5以上的時期。另外，作為上述對數增殖期，優選濁度顯示為1.0以上的時期，更優選濁度顯示為2.0以上的時期，進一步優選濁度顯示為3.0以上的時期。