[發明專利]谷胱甘肽及γ-谷氨酰半胱氨酸的制造方法

有效

• 申請號: 200880019101.6
• 申請日: 2008-04-04
• 公開（公告）號: CN101715490A
• 公開（公告）日: 2010-05-26
• 發明（設計）人: 田畑和彥;米谷良之
• 申請（專利權）人: 協和發酵生化株式會社
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12N15/09
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 王海川;穆德駿

1.一種谷胱甘肽或γ-谷氨酰半胱氨酸的制造方法，其中包括：在 培養基中培養細菌，在該培養基中生成并累積谷胱甘肽或γ-谷氨酰半 胱氨酸，以及從培養物中收集谷胱甘肽或γ-谷氨酰半胱氨酸，

所述細菌中以下[1]所述的具有將細胞內的谷胱甘肽轉運到細胞外 的活性(以下稱為谷胱甘肽轉運活性)的蛋白質的活性、以及參與谷胱甘 肽或γ-谷氨酰半胱氨酸的生物合成的蛋白質的活性高于親本株，所述 參與谷胱甘肽或γ-谷氨酰半胱氨酸的生物合成的蛋白質為γ-谷氨酰半 胱氨酸合成酶(GSHI)和/或谷胱甘肽合成酶(GSHII)，

所述細菌是使用編碼GSHI和/或GSHII的DNA對親本株進行轉 化而得到的細菌、或者是通過改變親本株的染色體DNA上存在的編碼 GSHI和/或GSHII的基因而得到的、i)GSHI和/或GSHII的比活性高于 親本株的細菌、或ii)GSHI和/或GSHII的產量高于親本株的細菌，并 且

所述細菌是使用編碼[1]所述的蛋白質的DNA對親本株進行轉化 而得到的細菌、或者是通過改變親本株的染色體DNA上存在的編碼[1] 所述的蛋白質的基因而得到的、i)[1]所述的蛋白質的比活性高于親本 株的細菌、或ii)[1]所述的蛋白質的產量高于親本株的細菌，

[1]由序列號3所示的氨基酸序列構成的蛋白質。

2.如權利要求1所述的制造方法，其中，所述細菌是使用編碼 GSHI和/或GSHII的DNA對親本株進行轉化而得到的細菌、或者是通 過改變親本株的染色體DNA上存在的編碼GSHI和/或GSHII的基因而 得到的、i)GSHI和/或GSHII的比活性高于親本株的細菌、或ii)GSHI 和/或GSHII的產量高于親本株的細菌，并且

所述細菌是使用以下[1]所述的DNA對親本株進行轉化而得到的 細菌，

[1]由序列號28所示的堿基序列中的編碼區的堿基序列構成的 DNA。

3.如權利要求1或2所述的制造方法，其中，GSHI及GSHII為 以下[1]所述的蛋白質，

[1]由序列號47或48所示的氨基酸序列構成的蛋白質。

4.如權利要求1或2所述的制造方法，其中，編碼GSHI及GSHII 的DNA為以下[1]所述的DNA，

[1]編碼權利要求3的[1]所述的蛋白質的DNA。

5.如權利要求4所述的制造方法，其中，編碼GSHI及GSHII的 DNA為以下[1]或[2]所述的DNA，

[1]由序列號49或50所示的堿基序列構成的DNA；

[2]由序列號49或50所示的堿基序列中的編碼區的堿基序列構成 的DNA。

6.如權利要求1所述的制造方法，其中，細菌是具有谷胱甘肽或 γ-谷氨酰半胱氨酸分解活性的蛋白質的活性低于親本株或喪失的細菌， 所述具有谷胱甘肽或γ-谷氨酰半胱氨酸分解活性的蛋白質是γ-谷氨酰 轉肽酶。

7.如權利要求6所述的制造方法，其中，γ-谷氨酰轉肽酶為以下 [1]所述的蛋白質，

[1]由序列號51所示的氨基酸序列構成的蛋白質。

8.如權利要求6所述的制造方法，其中，具有谷胱甘肽或γ-谷氨 酰半胱氨酸分解活性的蛋白質的活性低于親本株或喪失的細菌是具有 編碼γ-谷氨酰轉肽酶的基因發生缺陷的染色體DNA的細菌。

9.如權利要求8所述的制造方法，其中，編碼γ-谷氨酰轉肽酶的 基因為以下[1]所述的DNA，

[1]編碼權利要求7的[1]所述的蛋白質的DNA。

10.如權利要求9所述的制造方法，其中，編碼γ-谷氨酰轉肽酶 的基因為以下[1]或[2]所述的DNA，

[1]由序列號52所示的堿基序列構成的DNA；

[2]由序列號52所示的堿基序列中的編碼區的堿基序列構成的 DNA。