[發明專利]植物通過表達非哺乳動物糖基轉移酶而表現出哺乳動物類型的糖基化作用

有效

• 申請號: 200880016408.0
• 申請日: 2008-04-17
• 公開（公告）號: CN101702919A
• 公開（公告）日: 2010-05-05
• 發明（設計）人: G·J·A·勞溫德;D·E·A·弗洛拉克;H·J·博斯
• 申請（專利權）人: 國際植物研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;C07K14/00
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種產生能將半乳糖殘基以β1,4-鍵加至N-連接的聚糖上的轉基因煙草或 轉基因煙草細胞的方法，該方法包含：

(a)將編碼雞β1,4-半乳糖轉移酶1的核酸分子插入煙草或煙草細胞中；并且

(b)選擇攝入(a)中所述核酸分子并表達所述核酸分子的轉基因煙草或轉基因煙 草細胞，

從而產生出能將半乳糖殘基以β1,4-鍵加至N-連接的聚糖上的轉基因煙草或轉 基因煙草細胞。

2.根據權利要求1所述的方法，其中雞β1,4-半乳糖轉移酶1的氨基酸序列為 SEQ?ID?NO:2所示的序列。

3.根據權利要求2所述的方法，其中雞β1,4-半乳糖轉移酶1在其N-末端帶 有哺乳動物β1,4-半乳糖轉移酶1的N末端片段延伸，且其中哺乳動物β1,4-半乳糖 轉移酶1的N末端片段如SEQ?ID?NO:21：MRLREPLLSGSAA所示。

4.根據權利要求1所述的方法，其中雞β1,4-半乳糖轉移酶1中的胞漿-跨膜- 莖區CTS由來源于哺乳動物唾液酸轉移酶的CTS取代，且其中雞β1,4-半乳糖轉 移酶1如SEQ?ID?NO:11所示。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述轉基因煙草或轉基因煙草細胞產生 包含雜合類型的N-連接的聚糖的糖蛋白，所述N-連接的聚糖不含β1,2-木糖殘基和 α1,3-巖藻糖殘基。

6.根據權利要求5所述的方法，其中產生的不含β1,2-木糖和α1,3-巖藻糖殘 基的雜合類型的N-連接的聚糖的量是表達野生型人β1,4-半乳糖轉移酶的植物細胞 或植物產生的量的至少兩倍。

7.一種產生包含一種或多種雜合類型的半乳糖基化N-連接的聚糖的異源糖蛋 白的方法，該方法包含：

(a)將編碼雞β1,4-半乳糖轉移酶1的第一核酸分子和編碼異源糖蛋白的第二核 酸分子插入煙草或煙草細胞中，從而產生轉基因煙草或轉基因煙草細胞；并且

(b)在適合所述的第一和第二核酸分子表達的條件下維持所述的轉基因煙草或 轉基因煙草細胞，從而產生出包含一種或多種雜合類型的半乳糖基化的N-連接的 聚糖的異源糖蛋白。

8.根據權利要求7的方法，其中所述方法進一步包含從轉基因煙草或轉基因 煙草細胞中分離異源糖蛋白。

9.根據權利要求7所述的方法，其中異源糖蛋白選自抗體、疫苗抗原、細胞 因子、激素、酶、細胞粘附分子和膠原。

10.根據權利要求7所述的方法，其中雞β1,4-半乳糖轉移酶1在其N-末端帶 有哺乳動物β1,4-半乳糖轉移酶1的N末端片段延伸，且其中哺乳動物β1,4-半乳糖 轉移酶1的N末端片段如SEQ?ID?NO:21：MRLREPLLSGSAA所示，且其中雞β1,4- 半乳糖轉移酶1如SEQ?ID?NO:2所示。

11.根據權利要求7或8所述的方法，其中所述糖蛋白的N-聚糖不含β1,2木 糖和α1,3-巖藻糖殘基。

12.一種編碼多肽的核酸，所述的多肽由以下組成：

(a)雞β1,4-半乳糖轉移酶1的氨基酸序列，和

(b)其N-末端延伸，其中該延伸是哺乳動物β1,4-半乳糖轉移酶1的N末端片 段，且其中該哺乳動物β1,4-半乳糖轉移酶1的N末端片段如SEQ?ID?NO:21： MRLREPLLSGSAA所示，且其中雞β1,4-半乳糖轉移酶1如SEQ?ID?NO:2所示。

13.根據權利要求12的核酸，其中該核酸編碼SEQ?ID?NO：9的氨基酸序列。

14.編碼如SEQ?ID?NO：11所示的雞β1,4-半乳糖轉移酶1的核酸。

15.根據權利要求14的核酸，其中核酸如SEQ?ID?NO：10所示。