[發明專利]檢測神經胰蛋白酶體內活性的方法、該方法的使用和集聚蛋白 C末端的 2 2 k D a片段作為診斷和檢測神經胰蛋白酶相關失調的生物標志物的用途

無效

• 申請號: 200880015511.3
• 申請日: 2008-04-26
• 公開（公告）號: CN101680022A
• 公開（公告）日: 2010-03-24
• 發明（設計）人: P·桑德雷格;S·赫特威爾;A·施蒂芬;宮井和政;B·昆茲
• 申請（專利權）人: 紐羅圖恩股份公司;蘇黎世大學
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 羅菊華

發明領域

本發明涉及一種用于檢測神經胰蛋白酶(neurotrypsin)體內活性 的方法、該方法的用途和集聚蛋白(agrin)C末端22kDa片段作為生物 標志物在所有與神經胰蛋白酶活性直接或間接相關的不同診斷或臨床 應用中的使用。

生物標志物可報告在疾病或治療中正在進行的生物學現象。生物 標志物定義為任何作為正常的或病理生物學過程、或對治療干預的藥 理學反應的指標，可以客觀測量和評估的特征。不同類型的生物標志 物可報告分子特征、生理參數(例如血壓、心率)，或提供影像信息。 重要的是，它們提供關于“結果”的信息：例如關于分子、細胞或生 理學機制的結果，關于治療的益處或關于治療干預的風險。有用的生 物標志物應滿足兩個標準，它們必須與疾病或治療中進行中的生物學 機制相關，并且它們必須與臨床結果在統計學上相關。

神經胰蛋白酶是一個類胰蛋白酶絲氨酸蛋白酶。它表現出獨特的 結構域組成(Proba等，1998)。它由富脯氨酸的堿性片段、一個Kringle 結構、四個富半胱氨酸的清除受體結構域(SRCR)和一個蛋白酶結構 域組成。

神經胰蛋白酶主要在大腦皮層的神經元、海馬和扁桃體中表達 (Gschwend等，1997)。通過免疫組化，神經胰蛋白酶定位于突觸前 膜、不對稱(興奮性)和對稱(抑制性)突觸的突觸前活性區(Molinari 等，2002)。

神經胰蛋白酶在神經精神失調以及神經系統外的失調中起重要作 用。

最近，神經胰蛋白酶被確定為一種嚴重常染色體隱性形式的智力 遲鈍的原因(Molinari等，2002)。遭受依賴于神經胰蛋白酶的智力 遲鈍的個體表現出神經胰蛋白酶基因第7個外顯子中4個堿基對缺失， 其所導致的缺少催化結構域的縮短蛋白。受影響個體中病理生理學表 型和發生疾病的年齡將神經胰蛋白酶特征化為適應性突觸功能(比如 晚期神經發育中的突觸重組和成人突觸可塑性)的調節因子。在最初 18個月的正常精神運動發育中，受影響的個體在大約兩歲時表現出智 力遲鈍的初步跡象。這表明神經胰蛋白酶功能作為例如建立和/或維持 高級認知功能必需的適應性突觸功能在大腦發育的晚期中至關重要。

WO2006/103261中表明在轉基因小鼠運動神經元中神經胰蛋白酶 過表達導致神經肌肉接頭的退化，從而反過來導致去神經支配的肌肉 纖維的死亡。肌肉纖維的喪失是老年人中發現的肌肉萎縮類型的特征， 命名為肌肉減少癥。因此已經假定對神經胰蛋白酶的抑制可以對依賴 于年齡的肌肉纖維退化、肌肉纖維喪失和骨骼肌萎縮具有有益的作用。

進一步的數據(Aimes等，2005)表明類似神經胰蛋白酶的絲氨 酸蛋白酶在血管功能和血管發生中具有潛在影響。

鑒于神經胰蛋白酶在新陳代謝中的中心作用，確定和監測患者中 神經胰蛋白酶相關的失調，或評估藥物對體內神經胰蛋白酶狀態的影 響各自都令人期待。

發明概述

發明人已發現本發明的目標可以通過根據權利要求1的方法實 現，其中在腦脊液(CSF)、或血液或尿液中檢測集聚蛋白22kDa片段 以確定神經胰蛋白酶的體內活性，并且通過根據權利要求3的方法的 使用以診斷和監測神經胰蛋白酶相關失調。本發明進一步包括根據權 利要求8將集聚蛋白22kDa片段作為特異性生物標志物的用途。

進一步獨立的權利要求針對于集聚蛋白22kDa片段在確定物質對 神經胰蛋白酶活性影響的臨床或臨床前研究中作為生物標志物的使 用，由重組技術(參照根據權利要求1的方法)制備的集聚蛋白22kDa 片段的用途，以及由重組技術或化學合成制備集聚蛋白22kDa片段或 部分，其作為生成天然或重組抗體或其它特異性結合蛋白的靶標的用 途

本發明的優選實施方案在子權利要求中討論。

附圖簡述

圖1顯示人集聚蛋白的蛋白質序列(SEQ?ID?NO：1)。未加工的 前體全長為2045個氨基酸。在所示的序列部分標記了α-和β-切割位 點的位置。此外標記了在實施例中涉及的一些亞序列。集聚蛋白22kDa 片段的序列由粗體顯示。