[發明專利]用于豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）病毒生長的非猿猴細胞

有效

• 申請號: 200880007410.1
• 申請日: 2008-01-11
• 公開（公告）號: CN101668846A
• 公開（公告）日: 2010-03-10
• 發明（設計）人: F·A·祖克曼
• 申請（專利權）人: 伊利諾伊大學評議會
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02;C12N7/08;C12P21/04
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司
• 代理人: 張廣育;姜建成

相關專利申請的交叉引用?

本申請要求以2007年1月12日提交的流水號為US?60884782和2007年8月17日提交的流水號為US?60956597的申請為優先權基礎，這些申請中不與本文矛盾的內容均通過引用的方式納入本文。?

政府資助的研究和開發的聲明?

無?

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是豬的一種病毒疾病，該疾病與曾經重創豬肉產業的任何現有的或以前的感染性疾病相比，每年都會造成最大的經濟損失。還被稱為“神秘豬病(Mystery?Swine?Disease)”、豬不育與呼吸綜合征(SIRS)及“藍耳病”的PRRS最初于1987年在北美及于1990年在歐洲被首次檢測到。從那時起，PRRS開始在全世界除澳大利亞外的豬生產區成為豬產業的一個主要威脅。PRRS對幼仔和新生小豬的影響最顯著。在感染的母豬的一窩幼仔中有多達20-30％的小豬為死胎，在感染的獸群中多達80％的小豬會在斷奶前死亡。因此，該疾病會對經濟產生破壞性的后果(見Chladek等人的美國專利5476778)。一項部分由國家豬肉委員會(National?Pork?Board)資助的研究中指出，僅在美國由PRRS造成的損失就超過5.6億美元(Neumann?EJ?et?al.，2005)。?

對PRRS的研究及診斷和治療方法的開發(包括新疫苗和疫苗生產技術)受到體外培養PRRS病毒的選擇方案的有限可用性的限制。以前，現有技術已知猿猴細胞是用于維持PRRS生長以進行疫苗生產的僅一可用細胞系類型。猿猴細胞系MA-104及相關衍生物(如MARC-145)可能代表迄今為止實際應用于支持PRRS病毒體外復制的唯一選擇。?

本發明對于現有技術的改進在于，提供用于操作PRRS病毒的其他選擇，例如可支持PRRS生長的非猿猴細胞的實施方案。

其他的結果不如意的方法已經被用于開發用于PRRSV生長的可選?方案。在一種方法中，豬肺泡巨噬細胞可用于PRRSV生長；然而，分離自不同豬的細胞中高水平的固有變異性被認為是一個缺點(見Vincent?etal.，2005；Bautista?et?al.，1993)。在另一種方法中，Weingartl等人在將從12周齡豬獲得的原代豬肺泡巨噬細胞轉染后建立了豬單骨髓細胞系。經測試這些細胞不能支持PRRSV的復制(Weingartl?et?al.，2002，Journal?ofVirological?Methods?104：203-216)。相反，本發明令人吃驚地尤其公開了這樣的發現，即來自胎豬的某些細胞確實能夠支持PRRSV生長。?

利用本發明所惠及的技術應用包括應用研究方面，例如除了能夠在基礎研究水平研究PRRS病毒的生長之外，還有獸醫疫苗的生產。PRRSV疫苗(其為改良的活疫苗或滅活的死疫苗)可通過本發明的細胞和細胞系產生。用于培養這種具體病毒的工具和相關的方法在生成用于診斷應用的材料的情形中也是重要。在意欲強調科學突破的類似歷史情形中，由于體外培養病毒困難及缺乏可選方案，操作人類免疫缺陷病毒(HIV)的能力普遍受到限制。在研究及生成HIV的診斷及潛在疫苗的能力方面的關鍵進步歸因于這樣的轉折性事件，即能夠在體外成功地培養該病毒；見Gallo?RC，2002，Historical?essay.The?early?years?ofHIV/AIDS；Science?298(5599)：1728-30。?

控制PRRS疾病的主要局限被認為是在于疫苗技術的可用性和有效性。因此用于PRRS病毒生長的創新細胞和方法的貢獻可表示以下能力方面的顯著進步：即操作PRRS病毒，開發其他的及/或改良的疫苗技術，以及解決PRRS疾病的問題。?

發明內容

本發明在廣義上涉及能夠繁殖PRRS病毒的非猿猴細胞及使用這種細胞繁殖PRRS病毒的方法。?

在一個實施方案中，本發明提供了一種能夠繁殖PRRS病毒的分離的非猿猴細胞，其中所述非猿猴細胞獲自動物個體并被培養至少5個傳代。?

在一個實施方案中，本發明提供了一種能夠被PRRS病毒感染和/或繁殖PRRS病毒的分離的豬胎肺細胞。在一個實施方案中，所述細胞為肺泡巨噬細胞。在一個實施方案中，所述細胞在培養基中繁殖至少5個傳代。在一個實施方案中，所述細胞在培養物中繁殖至少10個傳代。在一?個實施方案中，所述細胞在培養物中繁殖至少20和/或50個傳代。?