[發明專利]使用酵母菌通過丁酰-CoA作為中間體制備丁醇的方法

無效

• 申請號: 200880004615.4
• 申請日: 2008-02-11
• 公開（公告）號: CN101631864A
• 公開（公告）日: 2010-01-20
• 發明（設計）人: 李相燁;埃萊夫塞里奧斯·特里帕·保特塞克斯;張俞信
• 申請（專利權）人: 生物普爾肯株式會社
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 樓高潮

1.一種具有丁醇產生能力的重組酵母菌，所述重組酵母菌中引入了能夠通過將CoA半分子轉移給有機酸而將有機酸轉化成有機酸-CoA的CoAT(CoA-轉移酶)-編碼基因。

2.根據權利要求1所述的具有丁醇產生能力的重組酵母菌，其特征在于，所述CoAT為乙酰-CoA:丁酰-CoA?CoA-轉移酶。

3.根據權利要求2所述的具有丁醇產生能力的重組酵母菌，其特征在于，所述CoAT編碼基因為來自梭狀芽胞桿菌屬的ctfAB。

4.根據權利要求1所述的具有丁醇產生能力的重組酵母菌，其特征在于，酵母菌具有編碼將乙酰-CoA轉化成乙酰乙酰-CoA的酶(THL)的基因。

5.一種生產丁酰-CoA的方法，所述方法包括在含有丁酸的培養基中培養權利要求1-4中任意一項所述的重組酵母菌。

6.根據權利要求5所述的生產丁酰-CoA的方法，其特征在于，所述培養基進一步含有脂肪酸。

7.根據權利要求6所述的生產丁酰-CoA的方法，其特征在于，脂肪酸具有4-24個碳原子。

8.一種生產丁醇的方法，所述方法包括在含有丁酸的培養基中培養權利要求1-4中任意一項所述的重組酵母菌以產生丁醇；并從培養液中回收所產生的丁醇。

9.根據權利要求8所述的生產丁醇的方法，其特征在于，所述酵母菌本身被表達以具有編碼AAD(乙醇/乙醛脫氫酶)的基因，顯示AAD活性。

10.根據權利要求8所述的生產丁醇的方法，其特征在于，所述酵母菌為其中具有被引入的AAD-編碼基因的重組酵母菌。

11.根據權利要求10所述的生產丁醇的方法，其特征在于，AAD-編碼基因為來自梭狀芽胞桿菌屬的adhE1或者adhE2。

12.根據權利要求8所述的生產丁醇的方法，其特征在于，所述培養基進一步含有脂肪酸。

13.根據權利要求12所述的生產丁醇的方法，其特征在于，脂肪酸具有4-24個碳原子。

14.一種生產丁醇的方法，所述方法包括下列步驟：

將權利要求1-4中任意一項所述的重組酵母菌與具有丁酸產生能力的微生物共培養，使丁酸由具有丁酸產生能力的微生物產生；允許重組酵母菌使用產生的丁酸產生丁醇；并且

從培養液中回收丁醇。

15.根據權利要求14所述的生產丁醇的方法，其特征在于，所述酵母菌本身被表達以具有編碼AAD(乙醇/乙醛脫氫酶)的基因，顯示AAD活性。

16.根據權利要求14所述的生產丁醇的方法，其特征在于，所述酵母菌為其中具有被引入的AAD-編碼基因的重組酵母菌。

17.根據權利要求16所述的生產丁醇的方法，其特征在于，AAD-編碼基因為來自梭狀芽胞桿菌屬的adhE1或者adhE2。

18.根據權利要求14所述的生產丁醇的方法，其特征在于，所述培養基進一步含有脂肪酸。

19.根據權利要求18所述的生產丁醇的方法，其特征在于，脂肪酸具有4-24個碳原子。

20.一種生產丁酰-CoA的方法，所述方法包括在含有脂肪酸的培養基中培養能夠由脂肪酸生物合成丁酰-CoA的酵母菌。

21.根據權利要求20所述的生產丁酰-CoA的方法，其特征在于，脂肪酸具有4-24個碳原子。

22.一種生產丁醇的方法，所述方法包括：

在含有脂肪酸的培養基中培養能夠由脂肪酸生物合成丁酰-CoA的酵母菌以產生丁醇；和

從培養液中回收產生的丁醇。

23.根據權利要求22所述的生產丁醇的方法，其特征在于，脂肪酸具有4-24個碳原子。

24.根據權利要求22所述的生產丁醇的方法，其特征在于，所述酵母菌本身被表達以具有編碼AAD(乙醇/乙醛脫氫酶)的基因，顯示AAD活性。