[實用新型]檢測豬繁殖障礙性病毒傳染病病原的試紙條

無效

• 申請號: 200820148807.X
• 申請日: 2008-08-28
• 公開（公告）號: CN201285399Y
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發明（設計）人: 張改平;肖治軍;李學伍;鄧瑞廣;楊艷艷;楊繼飛;趙東;王愛萍;邢廣旭;柴書軍;劉慶堂
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577;G01N33/545;G01N33/544
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司
• 代理人: 陳大通

技術領域

本實用新型涉及一種檢測豬病毒性傳染病病原的器具，特別是涉及一種檢測豬繁殖障礙性病毒傳染病病原的試紙條。

技術背景

我國是生豬的生產和消費大國。隨著大中小型規模化養豬場、種豬場數量的逐年增加，豬繁殖障礙性疾病已成為我國規模化豬場最重要的疾病之一，發病率平均達30％以上，造成巨大的經濟損失，并嚴重制約著養豬業的發展。豬繁殖與呼吸綜合癥病毒(PRRSV)、豬細小病毒(PPV)和豬乙型腦炎病毒(JEV)是造成豬繁殖障礙的三種重要病毒。PRRSV引起豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)，主要表現為感染母豬發熱，厭食，懷孕后期發生流產、死胎、木乃伊胎和弱仔等，感染仔豬發生呼吸困難(肺炎)、免疫機能障礙和高死亡率，因部分病豬的耳朵發紫，又稱藍耳病。藍耳病近年來在我國廣為傳播，如2006年我國南北10多個省(市、區)的豬群發生的“高熱病”現認為是高致病性PRRSV毒株引起，發病豬群達200萬頭，死亡40萬頭。因此，PRRSV被認為是導致近年來豬肉價格上漲的主要疾病之一。PPV引起豬細小病毒病，主要表現為受感染的母豬，特別是初產母豬及血清學陰性經產母豬發生流產、死胎、畸形胎、木乃伊胎和弱仔以及屢配不孕，而其他年齡的豬感染后不表現明顯的臨床癥狀。目前豬細小病毒病在我國豬群中廣為傳播，在大多數感染豬場呈地方性流行并且很難凈化，從而造成了持續的經濟損失，嚴重阻礙了養豬業的健康發展。JEV引起人畜共患病—流行性乙型腦炎。豬乙型腦炎，主要表現為感染豬發熱，厭食，母豬懷孕后期突然發生流產、死胎、木乃伊胎和弱仔等，新生仔豬良莠不齊、死亡率高，感染公豬出現睪丸炎。豬乙型腦炎主要由帶病毒的蚊蟲叮咬而傳播，主要分布在亞洲各國，我國大部分地區均有本病發生。

快速診斷是有效防控疾病的基礎。但在生產中，PRRSV、PPV和JEV引起的繁殖障礙性疾病，臨床癥狀相似，而且經常混合感染，單憑臨床病理變化往往不能及時正確診斷，最后確診有賴實驗室檢查，如檢測病豬樣品中病原或其特異抗體的存在、甚至用分離到的病原復制出臨床病例。目前實驗室檢測這三種病毒的方法有：(1)病毒分離與鑒定，無菌取病豬樣品接種肺泡巨噬細胞或MarC-145細胞(對PRRSV)、豬傳代腎細胞(對PPV和JEV)培養相應病毒，用酶或熒光素印跡抗體檢測細胞培養中的病毒，或用中和抗體鑒定病毒；(2)用間接酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測PRRSV感染豬血清中的特異抗體，用血凝抑制試驗(HI)檢測PPV或JEV感染豬血清中的特異抗體；(3)用反轉錄—聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測細胞培養物或病豬樣品中的PRRSV或JEV核酸，用PCR檢測細胞培養物或病豬樣品中的PPV核酸。

病毒分離與鑒定和PCR檢測技術操作復雜、需要儀器和較長的時間，不適合生產或現場的快速診斷需要。ELISA和HI比病毒分離與鑒定和PCR技術簡便、快速，常用來檢測PRRSV(ELISA)、JEV和PPV(HI)及其抗體，但仍不便于我國基層或現場普遍推廣應用。因為ELISA仍需要酶標儀和試劑，較復雜的操作步驟和經驗，HI也需要新鮮的豚鼠或鵝紅血球；這些儀器、試劑在基層或者缺乏，或者缺乏操作人員和保存條件。為此，有人研究報道了用斑點免疫金滲濾法來檢測PPV、JEV和PRRSV。這種方法利用微孔濾膜的滲濾濃縮和毛細管作用，將抗原—抗體反應由ELISA或HI的傳統液相環境轉到固相濾膜上快速進行，并采用膠體金印跡代替酶印跡和紅血球印跡，憑肉眼直接觀察膠體金的顯色狀況而判斷結果，因此比ELISA和HI更簡便、快速和實用。但目前報道的斑點免疫金滲濾法一次只檢測一種豬病病原，即使這樣，也至少需添加2次試劑和洗滌2次才能獲得結果；如果要鑒別診斷上述三種豬病病毒，則同時需要多種試劑盒和十幾個操作步驟，非專業的基層人員使用仍顯得不方便。

專利文獻CN?101216488A中公開了一種檢測豬繁殖與呼吸綜合癥抗體的試紙條及其制備方法，其是通過檢測PRRSV抗體進行診斷，而不是直接檢測病毒的存在，并且只能間接地診斷三種主要的豬繁殖障礙性病毒中一種(PRRSV)，有很大的局限性。

實用新型內容

本實用新型要解決的技術問題是提供一種結果顯示直觀、準確的檢測豬繁殖障礙性病毒傳染病病原的試紙條，該檢測試紙條和斑點免疫金滲濾法一樣特異、敏感但操作更簡便、快速和實用，且檢測成本更為低廉。

為解決上述技術問題，本實用新型采用的技術方案是：